肝细胞萃取-hplc分析法的建立及其在栀子.pdfVIP

第 34 卷第 4 期 Vol.34 ，Issue 4 2009 年 2 月 February ，2009 肝细胞萃取-HPLC 分析法的建立及其在栀子 保肝效应物质初步分析中的应用 1,2* 3 1 洪 敏 ，马宏宇 ，朱 荃 (1. 南京中医药大学 中医药研究院 国家规范化中药药理实验室，江苏 南京 210029 ； 2. 江苏省方剂研究重点实验室，江苏 南京 210046 ；3.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016) [摘要] 目的：建立肝细胞萃取-HPLC 分析法（HE-HPLC ），并应用其分析栀子中保肝作用的活性成分。方法：应用肝 细胞选择性地结合中药提取液中的活性成分，洗去未结合的其他成分后，使细胞靶点失活，被结合的活性成分从肝细胞中释 放出来，用高效液相色谱法对这些成分进行分析。结果：可检测到栀子水提液的主要保肝效应成分，初步确定为 2 个，其中 1 个为栀子苷，另 1 个有待进一步鉴定。结论：肝细胞萃取-HPLC 分析法基本可以反映化合物与细胞生物靶点(受体、通道、 酶等) 的相互作用；该体系中的保留成分和其药理作用有显著的相关性，可用于中药复杂体系物质基础的分析。 [关键词] 肝细胞萃取-HPLC 分析法（HE-HPLC ）；栀子；栀子苷 [1] 细胞色谱法是生物色谱的一种 ，根据药物产 组成；梯度滞后体积为 1.4 mL。SPE 固相萃取小柱 生的效应是通过药物与靶点 （ (受体、通道、酶等)结合 B 型，G18 填料 500 mg ）。 的基本原理进行研究。推想如果以活的肝细胞为固 1.2 试药 定相，使细胞的完整性、膜受体的立体结构、周围 栀子购于安徽省亳州市药材市场，经南京中医 环境和靶点得以保持，能够特异、选择性地与作用 药大学王春根教授鉴定为茜草科植物栀子 Gardenia 于肝细胞的活性成分结合，排除非作用杂质成分的 jasminoides Ellis. 的干燥成熟果实。对照品栀子苷 干扰。因此，建立了肝细胞萃取 （ -HPLC 分析法 749-200108 ，供含量测定用，中国药品生物制品 （ 检定所）。甲醇为色谱纯，纯水为 HE-HPLC ），并筛选研究以肝细胞为作用靶点的 Millipore Milli Q 中药的效应成分。 Plus 纯水系统所得，其余试剂均为分析纯。 栀子是茵陈蒿汤中的组成药物，茵陈蒿汤保肝 1.3 试液 作用的临床及药理报道确切。对于茵陈蒿汤保肝作 1.3.1 供试液的制备 栀子用水提取 3 次，每次 1.5 用的物质基础研究尚欠深入[2] ，需要进一步地、有 h ，纱布过滤，醇沉，回收乙醇，浓缩至每毫升含 针对性地寻找其效应成分。因此，分别对其中的组 0.9 g 生药。放冷，离心，上清液经 0.45 μm 滤膜滤 成药物进行了研究，并报道应用此方法分析栀子的 过，供 HPLC 分析。 保肝效应成分的结果。