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新生入所培训 电子显微镜及其应用 沈楠 2017.9 主要内容 电镜基本知识简介 常规生物样品制备方法 电镜样品前期处理方法及注意事项 一、电镜基本知识简介 电子显微镜的发展史 1938年，德国工程 师克诺尔（Knoll）和 卢斯卡（Ruska）制造 出了世界上第一台透射 电子显微镜(TEM)。 Max Knoll(1897-1969) Ernst Ruska(1906-1988) 1952年，英国工程师Charles Oatley 制造出了第一台扫描电子显微镜(SEM)。 光学显微镜的发明为人类认识微观世界提供了重要的 工具。随着科学技术的发展，光学显微镜因其有限的分辨 本领而难以满足许多微观分析的需求。20世纪30年代，电 子显微镜的发明将分辨本领提高到纳米量级，同时也将显 微镜的功能由单一的形貌观察扩展到集形貌观察、晶体结 构、成分分析等于一体。人类认识微观世界的能力从此有 了长足的发展。 经过七十多年的发展，今天的透射电镜已是具 有高达百万倍放大倍率，0.1—0.2nm 分辨本领而 且还能对几个纳米的微小区域进行化学分析和晶体 结构分析的高放大率、高分辨率的电子光学仪器。 它已成为全面揭示物质微观特征 （晶体结构、形貌 、化学成分等）的综合性仪器。 风行于世界的大型电镜，分辨本领为 2~3 埃，电压为100～500kV，放大倍数 50~1200000倍。 电镜种类 透射电子显微电镜 扫描电子显微电镜 分析电子显微镜 超高压电子显微镜 扫描隧道显微镜 原子力显微镜 ………… 光镜与电镜的比较 光镜与电镜的比较 光 镜 电 镜 光 源 可见光（波长 电子束（波长 400-700nm) 0.003-0.006nm) 分辨本领 200nm 0.1nm 透 镜 玻璃透镜 电磁透镜 真 空 大气 真空 样品对光吸收所 样品对电子的散 成像原理 形成的明暗差和 射所形成的明暗 颜色差（肉眼可 差 见） （肉眼不可见） 电镜成像及观察 电子显微镜的对比度是如何获取的？ 用电子致密物质对样品进行染色 •一些电子在通过样品时被电子致密物质染 色的结构散射 •另外一些电子通过了样本上没有染色 的部分而在荧光屏上形成一个图像 由于散射的电子从光束中丢失，染色的区域就显示为黑色，从而获得了黑 白的光学图像：明亮区域（没有染色）和暗区域（染色） 放大倍数 透射电镜的放大倍数是指电子图象对于所观察试样区的线性放大 率。目前高性能透射电镜的放大倍数变化范围为80倍到200万倍。 点分辨率（硅蒸镀膜） 线分辨率（金） TEM- 日立