选择性深低温对猴脑结构和MAP-2表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 选择性深低温对猴脑结构和MAP-2表达的影响 王忠文1 牛小群2 蒲军2 方绍龙2（通讯作者） （1云南省禄丰县人民医院创伤外科 云南楚雄 651200) (2昆明医科大学第二附属医院 云南昆明 650101） 【摘要】目的：观察选择性深低温对猴脑结构和神经元微管蛋白MAP-2表达的的影响。方法：4-10岁健康恒河猴8只，随机分为2组：双侧颈总动脉阻断冷灌注组（简称深低温组，n=5），双侧颈总动脉阻断常温灌注组（简称常温组，n=3）。常温下临时阻断双侧颈部血管10分钟后,通过一侧颈内动脉冷灌注,同侧颈内静脉回流,阻断其它颈部血管,建立选择性脑局部体外循环通路,降低脑温至18℃,60min恢复脑血流,实验动物自然复苏。脑组织多取材石蜡包埋切片行光镜检查及MAP-2免疫组化检测。结果：深低温组脑组织形态未见明显异常。常温组示神经细胞溶解坏死。常温组与深低温比较，MAP-2表达下降（Plt;0.01）；结论：选择性深低温能够降神经元Map-2的崩解从而减少脑缺血对神经元的破坏作用。 【关键词】 脑保护 恒河猴 低温 复苏 神经元微管蛋白 【中图分类号】R74 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）10-0198-01 研究表明，脑选择性深低温能提高脑对缺血缺氧的耐受性,同时避免了全身性深低温的各种并发症[1]。本研究通过观察猴脑选择性深低温断血流复苏后脑组织结构和MAP-2的表达，以进一步探明猴脑选择性深低温脑保护复苏技术的有效性和安全性。 材料和方法 1 实验动物:健康成年猕猴(恒河猴)8只,雄性,体重7.0-11.2kg,平均8.3kg。 2 模型的建立 麻醉生效后建立局部体外循环;右额叶插入脑温传感器,夹闭双侧颈外静脉、双侧颈总动脉和颈内静脉，常温下缺血10分钟后，经降温系统向右颈内动脉内输入2-4℃的林格氏液（常温组灌注36-37℃的林格氏液），保持灌注速度10ml/kg/min,同时自右侧颈内静脉头端回流,经左腹股沟静脉回收体循环血流经超滤器去除多余水分后复温至38℃,回输至左腹股沟静脉.脑温降至le;18℃后,维持脑温于此值60min后停止低温灌注液灌注,恢复上述血管正常血流,使脑自然复温,保持中心静脉压不超过10ｃｍＨ2Ｏ,分层缝合术区各层,肛温恢复至35℃,使猴自然恢复常态。 3 标本的取材和固定 深低温组术后12W处死（常温组未能复苏后直接取标本），用4%的多聚甲醛固定脑组织；操作步骤:(1)切片：切5um石蜡切片贴于防脱片胶处理过的载玻片上，90℃烤片2h；(2)脱蜡：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min；(3)水化：无水酒精，95%酒精，70%酒精各1-2min，蒸馏水洗3min；(4)PBS漂洗3次，每次3min；(5)抗原修复：根据一抗要求采用胰蛋白酶消化或高压抗原修复；(6)PBS漂洗3次，每次3min；(7)免疫组化染色，PBS漂洗洗3次，每次5min；滴加DAB显色液；(8)苏木素复染；(9)脱水：切片置70%酒精、80%酒精、无水酒精Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各3min；(10)透明：二甲苯Ⅰ、Ⅱ各3min；(11)加拿大树胶封片。 4.观察判断结果 光镜下观察脑组织神经结构；免疫组化染色阳性反应为黄-棕黄颗粒。MAP-2在神经元细胞胞浆中表达。每张切片随机选10个视野区域， 取其均值代表每只猴的阳性表达程度。参照蔡文琴等[3]介绍的神经细胞计数方法进行计数此区域内免疫组织化学染色阳性细胞数及细胞总数，并计算阳性率。 5.统计学分析 实验数据用SPSS 14.0统计软件包处理各参数，计量资料以x-plusmn;S表示，组间比较采用单因素方差分析，alpha;=0.05为检验水准，Plt;0.05，则认为有统计学意义。 实验结果 1 一般资料 深低温组全部成功建立了脑选择性深低温断血流复苏模型，常温组灌注后直接死亡。 2 结果 光镜下深低温组脑组织不同部位HE染色示神经组织结构正常;常温组海马CAⅠ区染色可见神经细胞核溶解、坏死（图1）。细胞骨架蛋白MAP-2表达的结果见（图2-3） 图1海马CAⅠ区（400times;） 图2常温组MAP-2times;400 图3深低温组MAP-2times; 400 ①深低温组（49.91plusmn;2.31）和常温组（23.58pl