选择性深低温灌注对猴脑缺血模型谷氨酸及γ-氨基丁酸代谢的影响.docVIP

精品论文 参考文献 选择性深低温灌注对猴脑缺血模型谷氨酸及γ-氨基丁酸代谢的影响 刘博虎1 范耀东2 廉坤1 李咏梅1 蒲军1（通讯作者） 　　（1昆明医科大学第二附属医院神经外科 650031；2昆明医科大学第三附属医院 650031） 　　【摘要】目的 观察猴脑缺血后行局部选择性深低温顺行脑灌注对谷氨酸（glutamic acid，Glu）、gamma;-氨基丁酸（gamma;-aminobutyric acid，GABA）代谢的影响。方法 成年恒河猴8只，随机分为两组：选择性深低温组（阻断双侧颈总动脉后深低温灌注，n=5）；空白对照组（仅阻断双侧颈总动脉，n=3）。建立猴脑选择性局部深低温体外循环模型，自缺血前30min开始利用微透析技术持续采集脑细胞外液，常温下临时阻断双侧颈总动脉10min后行顺行性低温灌注，降脑温至18℃，维持60min，用高效液相色谱-紫外线法测定谷氨酸、gamma;-氨基丁酸浓度。结果 谷氨酸在常温下???断双侧颈总动脉后迅速升高（P＜0.05）,行低温冷灌注后较常温脑缺血时明显下降（P＜0.05），恢复血供复温过程较冷灌注时谷氨酸无明显变化。gamma;-氨基丁酸在常温脑缺血、低温冷灌注及恢复血供复温过程中无明显变化，仅在低温冷灌注初期稍下降，随着冷灌注时间的延长逐渐恢复至灌注前水平（P＞0.05）。讨论 Glu表达下降、GABA表达变化不明显，提示脑脑缺血后选择性深低温灌注过程中主要通过降低Glu表达，减低了Glu的“兴奋性”毒性，提高了神经元对缺血缺氧的耐受性，促进受损脑细胞的修复，是脑缺血的重要保护机制之一 。 　　【关键词】谷氨酸 gamma;-氨基丁酸 恒河猴 选择性深低温 脑缺血 　　【中图分类号】R741 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085（2013）39-0063-02 　　研究表明：脑局部选择性深低温可以提高脑对缺血缺氧的耐受性，同时避免心衰、肺水肿等严重的全身并发症[1-3]。本实验通过微透析技术持续采集脑细胞外液，利用高效液相色谱-紫外线法测定谷氨酸、gamma;-氨基丁酸浓度，了解选择性深低温对猴脑缺血模型神经递质代谢的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　成年恒河猴8只，雄性，购于中国科学院昆明动物研究所实验中心，年龄7-10岁，平均8.2岁，体重6.9-11kg,平均8.1kg。 　　1.2 方法 　　1.2.1 动物模型建立 　　丙泊酚静脉麻醉后，留置尿管，放置肛温温度计，分离血管，右侧颈内动脉远心端插管连接降温系统；右颈内静脉远心端连接超滤复温装置，右颈内静脉近心端插管测中心静脉压；左股静脉近心端插管备回输复温后的体循环血流，右股静脉近端插管备低温灌注时回收体循环血流；右股动脉插管测平均动脉压；右顶叶插入针形脑温传感器并连接脑温监测仪，降温前全身肝素化，夹闭双侧颈外静脉、颈总动脉和颈内静脉，常温下缺血10min后，经降温系统向右颈内动脉内输入4℃的林格氏液，保持灌注速度10ml/kg/min，维持脑温在le;18℃，同时自右颈内静脉头端回流灌注液，经左股静脉回收体循环血流经超滤器去除多余水分后复温至37℃，回输至右股静脉，脑温降至le;16℃后，维持脑温于此值60min后停止低温灌注，恢复上述血管正常血流，使脑自然复温。术中持续监测生命体征和血流动力学变化。 　　1.2.2 标本采集及处理 　　左顶叶植入微透析针（透析膜有效长度4mm，截至分子量20ku），于断血前90min开始恒速（2.5mu;L/min）透析，60min后开始采集透析液，收集缺血前10min至复温后40min的脑细胞外液（每20min采集1管，共7管），收集的微透析液速置-80℃冰箱保存。将微透析采集大脑细胞外液通过紫外线法测定，用已知的标准品氨基酸色谱保留时间与微透析液的色谱保留时间进行对照定性，采用外标法计算色谱峰面积进行定量测定。 　　1.2.3 统计学处理 　　应用SPSS17.0统计软件，计量资料以x-plusmn;s表示，氨基酸含量不同时间位点之间的比较采用单因素方差分析。alpha;=0.05,P＜0.05认为有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 一般资料 　　选择性深低温组5只猴成功建立了脑选择性深低温断血流60 min 安全复苏模型，术后长期存活。对照组缺血60min后均未恢复意识，48h内死亡。 　　2.2 谷氨酸及gamma;-氨基丁酸代谢变化 　　谷氨酸在常温下阻断双侧颈总动脉后迅速升高（P＜0.05）,行低温冷灌注后较常温脑缺血时明显下降（P＜0.05），恢复血供