- 1、本文档共4页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
间接ELISA法检测油菜花粉过敏原方法的建立
精品论文 参考文献
间接ELISA法检测油菜花粉过敏原方法的建立
王 楠
盐城卫生职业技术学院基础医学部 江苏盐城 224005
摘要:目的 利用油菜花粉过敏原粗提液建立间接ELISA检测方法。方法 油菜花粉过敏原粗提液为抗原包被酶标板,通过对间接ELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件。结果 油菜花粉过敏原浓度稀释度为1:200(即浓度为10ug/ml),血清血清稀释度为1:100。采用已建立的间接ELISA反应条件,对10份阴性血清的检测结果进行统计学分析,确定间接ELISA的判定标准,D450值大于等于0.254为阳性。本试验建立的间接ELISA检测法敏感度为89.7%。
Abstract:Objectives To establish an ELISA technique to detect oilseed rape pollen allergen.Methods An indirect ELISA technique was developed using oilseed rape pollen allergen as a capture antigen.By optimizing the reaction conditions for each indirect ELISA,we determine the optimal reaction conditions.Results With oilseed rape pollen allergen as a capture antigen,the proper dilution of coating antigen was 1:200 and the proper dilution of serum was 1:100.The cut-off value of the assay was determined by statistics analysis based on 10 negative samples,with OD equal to or higher than 0.254 being considered positive.The test established indirect ELISA assay sensitivity was 89.7%.
前沿
花粉过敏是由花粉引发的过敏性疾病,可引发鼻粘膜、眼结膜、支气管,甚至哮喘的发生。油菜是我国大面积种植的农业经济作物,粉源广,花期长,是我国春季主要花粉之一。有研究表明目前对花粉过敏的患者中有7.1%的患者对油菜花粉过敏[1]。油菜花粉过敏的准确诊断,能有效的控制油菜花粉过敏的发生。因此,建立一种低成本,且具有较高特异性的油菜花粉过敏的诊断方法,具有重要的意义。故而,本实验以油菜花粉过敏原粗提液为抗原建立间接ELISA方法,用于对油菜花粉过敏的诊断。
材料与方法
1.材料
1.1 实验仪器与试剂 油菜花粉采自江苏盐城市郊,辣根过氧化物酶标记抗人IgE抗体(anti-human IgE/HRP)为美国Sigma公司产品,TMB显色液、牛血清白蛋白等试剂均为国产试剂。iMark酶标仪,美国Bio-Rad公司。
1.2 血清 待测阳性血清采自本市各医院诊治的39例哮喘患??,其中男性20例、女性19例,年龄3~52岁,平均(29.5plusmn;15.0)。患者的入选标准[2]:用油菜花粉粗提浸液进行皮肤点刺试验(SPT)阳性,风团直径ge;3mm,无花粉特异性免疫治疗史。阳性参考混合血清为油菜花粉粗提浸液SPT试验(风团直径ge;5mm)的5位患者,阴性参考血清为母亲无遗传过敏史脐带血清10份。
2.方法
2.1 油菜花粉过敏原粗提液 油菜花粉过敏原的提取参照参考文献[3]的方法,用Bradford法测定过敏原总蛋白量。
2.2 抗原最佳包被浓度和最佳血清稀释度的确定 按照方阵滴定法,用0.05mol/L pH9.6碳酸盐缓冲液将油菜花粉过敏原抗原包被液稀释,稀释度1:800、1:200和1:50,纵向包被酶标板,200ul/孔适当稀释的油菜花粉过敏原,水浴37℃ 2h,用PBS洗涤液(含20%的Tween20)洗涤5次,每次5min;每孔加入200ul含有3%BSA封闭液,4℃封闭过夜;涤液(方法同上);每孔加入200ul稀释血清,血清稀释度分别1:200、1:100和1:50,水浴37℃ 2h,涤液(方法同上);加入100 ul/孔anti-human IgE/HRP,稀释度为1:1000,水浴37℃ 2h,涤液(方法同上);加入100 ul/孔TMB显色液,水浴37℃ 30min;加入100 ul/孔 2mol/l硫酸终止液;在
您可能关注的文档
- 门诊儿科输液的医疗安全与护理对策.doc
- 门诊儿童静脉输液中造成疼痛及解决措施.doc
- 门诊儿童静脉输液的心理护理.doc
- 门诊内科急性腹痛患者的诊治体会.doc
- 门诊冠心病患者的健康教育.doc
- 门诊分诊失误的影响因素及干预方式研究.doc
- 门诊分诊护理中优质护理服务的作用分析.doc
- 门诊创建优质服务台的实践与体会.doc
- 门诊医务人员手卫生现状分析及对策.doc
- 门诊医护人员手卫生依从性情况分析及对策.doc
- 气候变化对人类社会的影响及应对策略.docx
- 江西洪州职业学院《工业机器人应用编程》2023-2024学年第一学期期末试卷.doc
- 教师素质提升对思政课一体化实施的影响与策略.docx
- 湖南电气职业技术学院《生物信息学基础》2023-2024学年第二学期期末试卷.doc
- 长沙航空职业技术学院《二外(英语)》2023-2024学年第二学期期末试卷.doc
- 网课自我管理课件.pptx
- 桥梁工程中抗裂砂浆检测技术及实践.docx
- 企业与员工职业成长需求不匹配的原因探析.docx
- 甘肃省金昌市永昌县四中2024-2025学年高三下学期第一次月考试题生物试题含解析.doc
- 成都市崇州市2025年数学四年级第二学期期末预测试题含解析.doc
文档评论(0)