第05章 分子发光.pptVIP

5-2 化学与生物发光分析法5-2-1 基本原理 1. 化学发光反应（Chemiluminescence） 在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。 A +B → C + D* D* → D + h? （1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物； （2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当 ?E=170～300 kJ/mol；位于可见光区； （3）发光持续时间较长，反应持续进行； 化学发光反应如果存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光（bioluminescence ）。 2.化学发光效率 化学效率： 发光效率： 时刻t 的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)： dc/dt 分析物参加反应的速率； 3. 化学发光强度与化学发光分析的依据 在化学发光分析中，被分析物相对于发光试剂少得多，对于一级动力学反应： dc/dt =Kc； K 为反应速率常数。 定性依据： （1）在一定条件下，峰值光强度与被测物浓度成线性； （2）在一定条件下，曲线下面积为发光总强度(S)，其与被测物浓度成线性： 4. 装置与技术 装置流程： 发光反应室 光检测器 信号放大器 显示与记录 发光反应可采用静态或流动注射的方式进行： 静态方式：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合， 测最大光强度或总发光量；试样量小，重复性差； 流动注射方式：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时通过测量室，连续发光，测定光强度；试样量大； 5. 特点 灵敏度极高 例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光分析，可测定2?10-17mol/L的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含量 仪器设备简单 不需要光源、单色器和背景校正； 发射光强度测量无干扰 无背景光、散射光等干扰； 线性范围宽 分析速度快 缺点：可供发光用的试剂少；发光反应效率低（大大低于生物体中的发光）；机理研究少。 5-2-2 发光反应的类型与应用 1. 气相化学发光反应 用于大气中O3、NO、NO2、H2S、SO2、CO等组分的监测。 a. 一氧化氮与O3的发光反应 NO + O3 → NO2* NO2* → NO2 + h? 发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3； b. 氧原子与SO2的发光反应 O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） SO2 + O + O → SO2* + O2 SO2 * → SO2* + h? 最大发射波长：200nm；灵敏度1ng/cm-3； O3 → O2 + O （1000 ?C石英管中进行） NO + O → NO2* NO2 * → NO2 + h? 发射光谱范围：400～1400nm；灵敏度1ng/cm-3； d. 氧原子与CO的发光反应： CO + O → CO2* CO2 * → CO2 + h? 发射光谱范围：300～500nm；灵敏度1ng/cm-3； c. 氧原子与NO的发光反应： e. 乙烯与O3的发光反应 乙烯与O3反应，生成激发态乙醛： CH2O* → CH2O + h? 最大发射波长：435nm；对O3的特效反应；线性响应范围1 ng/cm-3 ～1?g/cm-3； f. 火焰中的化学发光反应： 在富氢火焰中，也存在着很强的化学发光反应； 一氧化氮 NO + H → HNO* HNO * → HNO + h? 发射光谱范围：660～770nm； 最大发射波长：690nm； 在富氢火焰中： NO2 + 2H → NO + H2O 该反应十分迅速； 硫化物 挥发性硫化物SO2 、H2S 、CH3SH、 CH3SCH3等在富氢火焰中燃烧，产生很强的化学发光（蓝