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第1-2章 生产菌种的来源-2010
第二章 生产菌种的来源; 微生物工程的工业生产水平由三个要素所决定:生产菌种的性能,发酵及提纯工艺条件和生产设备。其中生产菌种是最重要的。
第一节 生物物质产生菌的筛选
微生物是生物活性物质的丰富资源,分离纯化和筛选活性的步骤如下:
标本采集---标本材料的预处理---富集培养---菌种初筛---菌种复筛---性能鉴定---菌种保藏 ;一、微生物是生物活性物质的丰富来源;分离与筛选的设计要求;二、含微生物样品的采集;食品 、海水、动物、植物、极端环境 ;稀释倒平板法示意图;1.dilute sample;稀释涂布法示意图;Inoculating an agar plate to obtain single colonies;平板划线方法示意图
A.划线分离操作;B.用于稀释液中,可连续划线;
C.用于较浓的菌样,分数次划线,每次划线后要烧接种环,然后再划下一区。;二、施加选择性压力分离法:;? 其??领是提供一些有利于所需菌株生长或不利于其他菌型生长的条件,例如,供给特殊的基质或加入某些抑制剂。;1、选择培养基分离法;2、加入抗生素或试剂来增加选择性;3、连续培养(continuous culture)(open culture);? 利用特殊的分离培养对大量混杂微生物进行初步分离的方法。
? 分离培养基是根据目的微生物特殊的生理特性或利用固体平板或某些代谢产物生化反应来设计的。
? 可显著提高分离效率;1、透明圈法;2、变色圈法;3、抑菌圈法--是常用的初筛方法;例:青霉素产生菌筛选方法; 1952 年 Lederberg 夫妇证明了微生物的抗药性是在未接触抗菌药物前自发地产生的,不是由抗菌药物诱导产生,抗菌药物仅起选择作用。
基本过程是:把长有许多菌落 ( 可多达数百个 ) 的母种培养皿倒置于包有灭菌丝绒布的木质圆柱上,使其上沾满来自培养皿平板上的菌落。然后可把这一“印章”的菌落一一接种到不同的选择性培养基平板上。待这些平板培养后,对各平板相同位置上菌落作对比后,就可选出适当的突变型菌株。;平板影印培养试验;平板影印培养试验 ;27
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