第一章__酶学与酶工程.ppt

可逆抑制作用和不可逆抑制作用的鉴别 1.物理方法 用透析、超滤和凝胶过滤等方法是否能除去抑制剂来鉴别可逆抑制作用和不可逆抑制作用。 2.动力学方法 在测定酶活力系统中加入一定量的抑制剂，测定酶反应的初速度，以初速度和酶浓度作图。 3 酶抑制剂的应用 保健药物 美容药物 农用药物 医药领域的应用 二氢叶酸合成酶 对氨基苯甲酸 二氢叶酸 四氢叶酸 二氢叶酸合成酶 二氢叶酸还原酶 转肽酶 痛风病药物作用机理 药 物 被抑制的酶 治疗机理概要 磺 胺 二氢叶酸合成酶 抗菌。苯甲酸类似物；核酸合成障碍。 氨基蝶呤， 氨甲蝶呤 二氢叶酸还原酶 抗白血病。FH4合成障碍；核酸合成障碍。 青霉素，β-氟代-D-丙氨酸 细菌转肽酶 抗菌。酶的自杀底物；胞壁合成障碍。 5-氟尿嘧啶(尿嘧啶类似物） 尿苷磷酸化酶 抗癌。酶的自杀底物；肿瘤细胞不能合成核酸。 5-氟脱氧尿苷酸 胸苷酸合成酶 抗癌。酶的自杀底物；肿瘤细胞不能合成DNA。 一些药物对酶的抑制效应 药 物 被抑制的酶 治疗机理概要 别嘌呤醇 黄嘌呤氧化酶 抗痛风。酶的自杀底物；抑制尿酸生成。 优降宁 线粒体单胺氧化酶 降血压。降低去甲肾上腺素在血管上积累。 开搏通(巯基甲脯氨酸) 血管紧张素转化酶 降血压。自杀性底物；抑制血管紧张素Ⅱ的生成。 阿卡波糖 α-葡萄糖苷酶 治疗糖尿病。酶的竞争性抑制剂；降低血糖。 一些药物对酶的抑制效应 酪氨酸酶（微生物产黑色素的关键酶） L-多巴（DOPA） 黑色素 酪氨酸酶抑制剂（曲酸） 酪氨酸 肉毒素的小分子抑制剂 肉毒素是由两个肽链构成的，一个重链和一个轻链。重链靶向并结合到神经末梢的表面受体。这样肉毒素就可进入神经末梢内部。一旦进入，轻链就与重链分离，切断控制神经肌肉功能的特异蛋白。这些蛋白的破坏有效阻止了引起肌肉收缩的神经递质的释放，而肌肉收缩是呼吸所必需的。肉毒素侵入神经末梢的结果就是导致瘫痪，最终导致窒息和死亡。 农业领域 胆碱酯酶:胆碱酯酶催化胆碱酯生成乙酰胆碱（神经系统受体），缺乏受体造成昆虫神经系统紊乱，痉挛而死。 第六节 蛋白质、酶和重组 蛋白质的分离纯化 一、蛋白质纯化的一般考虑 根据酶的使用目的确定纯化策略 制备方法的经济性。分离纯化用的原料来源要方便,成本要低; 效率高，步骤简单。（一般纯化步骤不超过5步） 条件要尽可能十分温和，防止酶变性失活。 建立灵敏、特异、精确的检测手段,评估纯化方法 二、防止酶变性失活的方法 尽可能在低温下进行分离纯化，尤其是有机溶剂存在时。 尽量避免局部过酸过碱。 防止泡沫的形成。 加入巯基试剂（如巯基乙醇，二硫苏糖醇等），避免酶被氧化。 加入蛋白酶抑制剂，防止内源性蛋白酶的降解。 （一）材料的选择 天然材料：早期酶制剂多是从动植物中提取。 但动植物原料生长周期长、成本高，又受地理、气候和季节等因素影响。 基因工程材料：对于天然不易得到的蛋白，目前通过工程菌或工程细胞表达而获得。 工业用酶多采用微生物发酵生产。 三、酶的分离和纯化 植物、动物、微生物细胞的特性比较 微生物发酵 目前工业应用酶大多数来自微生物，这是因为以微生物为生产原料有许多优点。 微生物种类繁多； 产酶微生物多； 一种微生物可以产多种酶； 微生物繁殖快、生产周期短、培养方便； 微生物易改造，可通过多种手段进行育种。 酶的发酵生产 酶的生产菌 —— 先决条件，直接影响发酵的生产成本。 对生产菌的要求： 非病源菌，同时在系统发育上与病原菌无关，不产毒素及其他生理活性物质； 产酶量高，最好分泌胞外酶； 生产菌稳定，不易变异、退化、不易感染噬菌体； 容易培养，能利用廉价原料，发酵周期短。 生产菌的获得 采样 — 分离 — 筛选 — 诱变； 采样：在富含该酶作用底物的场所采样； 在与酶活性最适条件相同的环境采样； 富集培养：投其所好，取其所抗。 分离：平板划线法、直接稀释法. 筛选：初筛、复筛； 向菌种中心购买