选精育教中高)31(-学化析分.pptVIP

对背景电解质的要求： ①在所选择的pH范围内有足够大的缓冲容量。 ②在检测波长处的吸收低。 ③自身的淌度低，即分子大而荷电小，以减少电流的产生。 ④应使被测组分带合适的电荷量，以实现有效进样和有合适的电泳淌度。 ⑤尽可能采用酸性缓冲溶液，在低pH下，吸附和电渗流值都很小。⑥与毛细管种类匹配，涂层毛细管只能在一定pH范围内使用。 3. 背景电解质 在CZE中，常用于毛细管电泳的缓冲溶液有硼砂、磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和醋酸盐等。 缓冲体系的pH值要求与样品的性质有关，通常酸性组分的分离选择在碱性条件下进行，而碱性组分则选择酸性介质分离，蛋白质、多肽、氨基酸等两性物质，可选酸性(pH2)也可选碱性(pH9)分离介质。糖类样品通常在pH9~11之间能获得最佳分离，羧酸或其它样品多在pH5~9之间选择分离条件。 pH的选择也和毛细管种类有关，很多涂层毛细管只能在一定pH范围内使用，如聚丙烯酰胺涂层毛细管，只能在pH4~9范围内使用，否则涂层易水解失效。 在相同的pH下，不同缓冲体系的分离效果可能相差很大，一般来说，能与样品发生相互作用的试剂可能是最好的。如分离糖类和DNA等分子时优先使用硼酸盐缓冲体系，因为硼酸根能与糖羟基形成配位键，从而增加糖的负电荷和分离度。硼酸盐缓冲体系也适用于其它含邻羟基或多羟基的化合物分离。 为了选择合适的pH值，需要pH调节剂调整介质的酸碱性。由于多数缓冲试剂属酸性物质，如磷酸，所以pH调节剂主要是碱类，常用的pH调节剂有NaOH、KOH、Tris等。有时也可考虑用胺或醇胺等有机碱，如乙醇胺、乙二胺。如果缓冲试剂为碱类，则可用酸作为调节剂，尽量使用弱酸，如 H3PO4。 缓冲剂及调节剂的浓度对改善分离、抑制吸附、控制焦耳热等均有影响，一般缓冲试剂的浓度控制在10～200mmol/L，有时为了抑制蛋白质等的吸附作用，可用高达500mmol/L的浓度（此时应减少分离电压）。电导率高的缓冲试剂如磷酸盐和硼酸盐等，一般控制在20mmol/L，电导小的缓冲试剂如硼酸其浓度可在100mmol/L以上。 如果缓冲体系经各种参数优化后仍无法给出良好的分离结果，可以加入添加剂以改善分离。添加剂种类较多： 1.无机电解质（NaCl、KCl） 2.有机溶剂（如甲醇、乙腈） 3.非电解质高分子（纤维素、多糖、聚乙烯醇、Triton X-100) 4. 功能性添加剂（手性冠醚、环糊精等） 二、胶束电动色谱（MEKC） 在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂（如SDS），当表面活性剂浓度超过其临界胶束浓度时，则形成亲水胶束，胶束具有疏水内核, 外层带负电荷。溶质分子则在极性缓冲液与胶束中心的非极性相（假固定相）之间有一定的分配。中性分子因其本身疏水性不同，在两相中分配存在差异。在电渗流作用下，胶束携带溶质一起前行，疏水性强的溶质和胶束结合得较牢，流出慢。不同分子在两相中的分配差异是MECC分离的基础。 常用的阴离子表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS）、N-月桂酰-N-甲基牛磺酸钠（LMT）、牛磺脱氧胆酸钠（STDC）等。 阳离子表面活性剂最常用的是季铵盐，如十二烷基三甲基溴化铵（DTAB）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）等。 非离子型表面活性剂有3-[3-(氯化酰胺基丙基)二甲基胺基]-1-丙基磺酸酯（CHAPS）等。 另外，还有手性表面活性剂，如胆酸、毛地黄皂苷、十二烷基-N-L-缬氨酸钠等。 表面活性剂选择时应考虑以下因素： （1）经济易得 （2）水溶性好 （3）紫外吸收背景越低越好 （4）不与样品发生破坏性作用 （5）所形成的胶束足够稳定 碳链较短的阴离子表面活性剂为优先选择对象。SDS易得、紫外吸收低，最为常用。如经浓度、缓冲溶液及pH优化，分离仍不佳，再换具有不同碳链长度或结构的其它阴离子表面活性剂。若结果仍不好，应考虑使用阳离子或中性、两性表面活性剂，如CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）、Triton X-100等。 应注意：阳离子表面活性剂可能会改变电渗流方向。 胶束修饰：添加重金属离子可改变胶束表面的电荷数量；使用混合表面活性剂可调节分离度或峰分布；加入另一种胶束，如采用多相体系（水－胶束－环糊精），利用多种作用改善分离。 三、毛细管电色谱（CEC） 以微填充柱作为分离柱，以电渗流驱动流动相完成色谱分离过程。 CEC中，固定相的选择主要依据HPLC的理论和经验，常用C18或C8 。 根据固定相的特性（正相、反相等），缓冲液可以是水溶液或有机溶液。常用乙腈－水或甲醇－水等为流动相。 毛细管分离条件选择流程 1.尽可能多地了解样品的类型、来源、组成及其性质。 2.根据样品性