微生物的恒温培养.PPT

Company Logo Company Logo Company Logo LOGO 培养基的配制与纯种分离 Company Logo 原理: 1.单个微生物过小,一般采取菌落培养法进行培养观察. 2.由于不同的微生物生长环境不同,种群间有明显界限.一个菌落可认为是同一菌种的集合.  Company Logo 选择培养基 常见的，培养细菌用肉汤培养基，培养放线菌用高氏一号培养基，培养真菌用马丁氏培养基。 具体看培养的菌种和用途，去查阅相关资料，比如一些实验指导教材、专门的著作或手册等。各种培养基的配方、用量、适合培养什么菌，都可以查得到的。  Company Logo 培养 方法 最常见的就是用培养皿，培养基中加入琼脂，倒成平板，可用来筛选、计数、鉴别、菌种复壮等。 还有液体摇瓶培养，这个一般用于扩大培养、发酵、产物提取等。 试管斜面，可用于菌种短期保存。 Company Logo 培养条件 恒温生化培养箱 培养时间从几个小时到几天 特殊培养条件，如厌氧 Company Logo 培养基的配制 灭菌 倒平板 微生物接种 恒温箱中培养 菌种保存 基本操作程序 Company Logo 操作内容 1.根据配方配制100ml牛肉膏蛋白胨培养基，溶解，调pH值后，分装在三角瓶中，加塞包扎。 2.分装约50ml蒸馏水在三角瓶中，加塞包扎。 3.包装5个培养皿，待用。 4.将以上物品置于高压蒸汽灭菌锅内灭菌。121℃，20min。 5.检查桌面用品是否齐全。 6.等灭菌锅压力将为0后，打开灭菌锅。烘干培养皿，适当冷却培养基与无菌水。 7.在酒精灯火焰5cm内倒平板，待冷却后，倒置。 8.将土壤样品置于冷却后的无菌水中，摇匀。 9.在酒精灯火焰5cm内，用接种环划线分离菌株。 10.倒置培养于培养箱内。 Company Logo Company Logo Company Logo 2.灭菌与消毒 灭菌与消毒： 实验中所用于培养的培养基和接种等用到的器具都需要进行灭菌，灭菌的方法常用的有高压蒸汽灭菌和干热灭菌。 接种时，手需要用70%酒精消毒，接种环或接种针需要灼烧灭菌。接种时，保持在火焰周围（火焰周围5cm处）。 用于微生物培养与接种的区域需要用紫外灯进行杀菌。 Company Logo 高压蒸汽灭菌 高压蒸汽灭菌法 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅内，加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、生理盐水、手术器械、玻璃容器及注射器等物品的灭菌。 Company Logo 原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干热好。 高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。 3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项： 1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。 Company Logo Company Logo Company Logo 操作流程 1.检查灭菌锅（清除锅内杂物） 2.加水（加之刻度处，不能少也不需多） 3.放入待灭菌物（不能太拥挤，盖上锅盖是，对角线旋紧螺丝） 4.接通电源（插座电源和灭菌锅电源同时打开） 5.放气（排除空气，知道有持续蒸汽排出为止） 6.升压（关掉排气阀门，使压力指针升至1.05kg/cm2 ，121℃） 7.保持（控制电源开关或者设定程序保持在121℃，30min） 8.降压（关电源） 9.烘干（等压力降至0后，打开螺丝，让锅盖移出部分空隙，让蒸汽烘干锅内物） 10.取物（若发现包装被破坏，则需重新灭菌） 11.放水 Company Logo WARNING警告: 一．不能使用此高压蒸汽灭菌器消毒任何有破坏性材料和含碱金属成份的物质。消毒这些物品将会导致爆炸或腐蚀内胆和内部管道，以及破坏垫圈。 危险物品清单：1.爆炸物质2.可燃性物质 3.氧化剂4.易燃物质 Company Logo WARNING警告: 二．含有盐分的液体漏出或溢出时，一定要及时擦干净，沿着盖子的密封圈要彻底擦干，否则会腐蚀容器和管道。三．在打开盖子前，确认压力已归于“0/npa”以下。