革兰氏染色四步法与改良两步法的比较.docVIP

精品论文 参考文献 革兰氏染色四步法与改良两步法的比较 徐斌 方传华 陈艾萍 徐伟红 　　（上海市同仁医院检验科 200050） 　　【摘要】目的 比较革兰氏染色经典的四步法与改良的两步法在临床微生物检测上的实验效率与性能结果。方法 对标准菌株质控品为（G-菌和G+菌）、血培养分级报告阳性标本、痰标本的总计120例样本采用革兰氏染色经典的四步法与改良的两步法进行实验比对，其中血培养阳性标本通过两种革兰氏染色方法一致符合，有28个革兰氏阳性细菌和32个革兰氏阴性细菌。其中痰直接涂片标本通过两种革兰氏染色方法结果有两株细菌在两步法染色判读结果为革兰氏阴性细菌而在四步法染色中结果为革兰氏阳性细菌。结论 经统计学分析差异，Pgt;0.05，表明两种血培养瓶的阳性检出率和阴性检出率在统计学上无显著性差异。由此得出结论，革兰染色二步法完全可以替代四步法，操作简易、染色快、效果好，大大缩短了标本处理的时间。 　　【关键词】革兰氏染色 四步法 两步法 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）34-0009-01 　　材料和方法 　　1 材料 　　1.1 标本来源和采集 　　标准菌株质控品G-菌为大肠埃希氏菌（ATCC29523）、G+菌为金黄色葡萄球菌（ATCC29213），血培养分级报告阳性标本（采用革兰氏染色直接涂片），痰标本，总计120例。 　　1.2 仪器与试剂 　　显微镜； VITEK2C全自动微生物鉴定药敏分析仪，法国生物梅里埃公司。BASO革兰氏染色液（经典四步法），上海贝沙公司；改良二步法革兰氏染色液250ml*2瓶/套，无锡飞伊生物科技有限公司。 　　2 方法 　　2.1 采用经典四步法革兰氏染色液操作步骤 　　（1）涂片：取干净的载玻片在涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。针对液体培养基：用接种环沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm左右的涂膜。针对固体培养基：先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。 　　（2）干燥：让涂片在空气中自然干燥。 　　（3）固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定。 　　（4）染色：将固定过的涂片初染滴加草酸铵结晶紫液，染1分钟。 　　（5）水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。 　　（6）媒染：滴加1滴碘液，染1分钟，水洗。 　　（7）脱色：吸去残留水，滴加95%乙醇脱色30秒钟至流出液无紫色，立即水洗。 　　（8）复染：滴加品红复染3分钟，水洗，染色结束。 　　2.2 采用改良二步法革兰氏染色液操作步骤 　　（1）用四步法中相同方法涂片、干燥、固定。 　　（2）染色 先初染A液结晶紫覆盖整个涂片、染色6秒钟，水洗。 　　（3）复染 水洗干燥后，显微镜下放大100倍、400倍、1000倍观测载玻片上的染色后样本。 　　2.3 细菌的种属鉴定 　　（1）对革兰氏染色后分类的革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌用生理盐水配置成相应的麦氏浓度的菌悬液。 　　（2）将菌悬液上机VITEK2C用对应的革兰氏阴性菌（GN卡）或革兰氏阳性菌鉴定卡（GP卡）种属鉴定，8～12小时后获得结果以确认与革兰氏染色实验的一致性。 　　2.4 统计学分析 对所有实验数据建立表格，两种方法比较采用四格表chi;2检验，以Plt;0.05表明差异有显著性。 　　结果 　　从2011年4月至2013年3月共收集了血培养阳性和痰标本各60份。其中血培养阳性标本通过两种革兰氏染色方法结果一致符合，有28个革兰氏阳性细菌和32个革兰氏阴性细菌。其中痰直接涂片标本通过两种革兰氏染色方法结果有两株细菌在两步法染色判读结果为革兰氏阴性细菌而在四步法染色中结果为革兰氏阳性细菌。经统计学分析，chi;2=0.015（Pgt;0.05），表明两种血培养瓶的阳性检出率和阴性检出率在统计学上无显著性差异。染色结果见表1。 　　表1 两种革兰氏染色方法对血培养阳性标本和痰标本染色结果的比较 　　注：两种方法的比较 Pgt;0.05 　　讨论 　　临床微生物检测作为指导临床抗菌药物正确合理使用中重要的基础环节，其中菌种的分离鉴定又是关键的第一步，只有对微生物准确快速的分类鉴定才能为后续的实验提供可靠的保障，从而为患者的救治提供针对性的抗菌药物。 　　当前随着我国面临越来越严峻的抗菌药物使用的形势，临床对微生物报告的快速性准确性提出了更高的要求，同时各级医院的微生物检测标本急剧增加，要在有限的实验人手、硬件等条件下，高效、迅捷、准确的处理微生物标本是各个临床微生物实验室所面临的重大课题[1-4]。革兰染色法是细菌学中广泛使用的一