直接滴定法（斐林氏溶液法）.ppt

直接滴定法（斐林氏溶液法） 还原糖的测定 实验目的 掌握直接法测定还原糖的原理和方法 一、原理 样品经过处理除去蛋白质等杂质后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糖水解为还原性单糖，用直接滴定法测定水解后样品中的还原糖总量。 本方法测定的是一大类具有还原性的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等。只是结果用葡萄糖或转化糖表示而已。 本法是国标分析法，适合于各类食品中还原糖的快速测定。检出限为0.1mg。 二、试剂 1、碱性酒石酸铜甲液：称取15克硫酸铜(CuSO4.5H20)及0.05克次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000毫升。 ??? 2、碱性酒石酸铜乙液：称取50克酒石酸钾钠及75克氢氧化钠，溶于水中，再加入4克亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000毫升，贮于橡胶塞玻璃瓶内。 ??? 3、乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100ml。4. 10.6%亚铁氰化钾溶液 ??? 三、样品 四、操作步骤 2.标定费林试剂 3.样品测定 3.样品测定 五、计算 六、注意事项 问题 * * 5、葡萄糖标准溶液：精密称取1.000克经过98-100℃干燥至恒重的纯葡萄糖，加水溶解后，加5毫升盐酸，并以水稀释至1000毫升，此溶液每毫升相当于lmg葡萄糖。 硬糖 1. 样品处理： 称样2.000g（液体样25~50ml） →溶解 →定容于200ml容量瓶，加3ml乙酸锌， 3ml亚铁氰化钾（静置30分钟） →过滤 于100ml容量瓶 →弃去初液（洗涤容量瓶） 吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10ml(甲、乙液各5ml)碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。 样品预滴定： ?样品溶液预测：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。 正式滴定： 样品溶液测定：吸取5.0ml碱性酒石酸铜甲液及5.0ml乙液，置于150ml锥形瓶中，加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1ml的样品溶液，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。 X3 =（C×v1 × V）∕（m× v2 ×1000）×100 式中： X--样品中还原糖的含量(以葡萄糖计)，%； C--葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ml； v1-- 滴定10 ml费林氏溶液（甲、乙液各5 ml）消耗葡萄糖标准溶液的体积，ml； v2--测定时平均消耗样品溶液的体积，ml； V--样品定容体积，ml； m--样品质量，g； 1.滴定过程要迅速，使整个过程在2-3分钟内完成，否则滴定终点不明显。 2.费林试剂乙液中加亚铁氰化钾使红色氧化亚铜沉淀生成可溶性复盐，反应终点更为明显。 3.醋酸锌和亚铁氰化钾液是蛋白质沉淀剂，用以除去样品中的蛋白质。 4.费林试剂取量要准确，特别是甲液，因为起反应的是铜离子，否则引起较大误差。