试验三斑马鱼性腺促熟及早期发育模式.PPTVIP

一、目的要求 掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术； 加深硬骨鱼早期形态发育模式的理解 斑马鱼性腺促熟和产卵调控 斑马鱼早期发育观察 实验三 斑马鱼性腺促熟及早期发育模式 二、实验内容 （一）、斑马鱼繁殖 性成熟斑马鱼 光 控 繁 殖 受 精 卵 孵 化 雌雄比例为1~2:1； 1 mm的网或板，防止食卵； 10 h光照，14 h黑暗，再次亮灯后不久，雌鱼便产卵 吸取缸底正常受精卵于培养皿中，孵化水温 25～28 ℃；孵化期间每天及时清除败育卵，并换水1～2次 4月龄性成熟； 分辨雌雄 ♀ ♂ （二）、斑马鱼早期发育观察（水温 28℃） 合子期 Zygote Period (0-0.75h) 卵裂期 Cleavage Period (0.75-2.2 h) 囊胚期 Blastula Period (2.25-5.25 h) 原肠胚期 Gastrula Period (5.3-10 h) 体节期 Segmentation Period (10-24 h) 咽期 Pharyngula Period (24-48 h) 孵化期 Hatching Period (48-72 h) Zygote Period (0-.75h) ——卵质向动物极流动，形成胚盘 2-cell Cleavage Period (0.75-2.2 h) —— 6次卵裂，15-20 min间隔分裂一次 4-cell 8-cell Blastula Period (2.25-5.25 h) ——卵黄合胞体层(yolk syncytial layer, YSL) 、表胚层(enveloping layer, EVL)、深层细胞(deep cells) 第10次卵裂 中期囊胚转换 囊胚早期 囊胚中期 囊胚晚期 囊胚早期 囊胚中期 囊胚晚期 50％下包 Gastrula Period (5.3-10 h) 50％下包 Segmentation Period (10-24 h) Pharyngula Period (24-48 h) Hatching Period (48-72 h) 实验报告撰写 斑马鱼作为模式生物的优点 斑马鱼胚胎发育时期的记录【选取6个以上不同时期的胚胎照片，并注明时间hours post-fertilization (hpf)、温度，并对发育过程做一简单描述，如卵裂类型，原肠作用中的细胞运动】 分类：斑马鱼为硬骨鱼鲤科鱼类，原产于印度、孟加拉国。 特征：体长4～6厘米；体呈纺锤形；背部橄榄色，体侧从鳃盖后直伸到尾未有数条银蓝色纵纹，臀鳍部也有与体色相似的纵纹，尾鳍长而呈叉形；雄鱼柠檬色纵纹；雌鱼的蓝色纵纹加银灰色纵纹。 饲养：最适水温28℃，在水温11～15℃时仍能生存；对水质的要求不高，隔天换水（日光晒过的淡水）。 斑马鱼一般4月龄性成熟，5月龄鱼繁殖较好；繁殖周期短，一般7天左右。 雌雄分辨：雌性（偏银灰色，体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性）；雄性（偏柠檬色，腹部扁平，身材显得修长）； 将亲鱼雌、雄分开饲喂2～3天（相互之间能够看到，可在饲养箱中加一玻璃隔板，将雌、雄分开），繁殖时将雌、雄按1～2∶1比例放入产卵池中进行产卵受精。斑马鱼一般凌晨产卵，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔2～3mm的网将亲鱼限制在产卵池的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。每条雌鱼可产卵300～1000粒。 卵子体外受精，体外发育，且速度快，24h胚胎发育成熟。 Cytoplasm streams toward animal pole to form the blastodisc During this period, the first 6 cleavages occur. The cells, or blastomeres, divide synchronously at about 15 minute intervals. 胚质上流和卵裂细胞不断增多，胚盘逐渐增高，至中期囊胚（高囊胚），增殖速度减慢，且胚盘细胞沿卵黄四周下包，胚盘变矮——低囊胚 囊胚期始于128细胞期，再经2次分裂进入midblastula transition 斑马鱼中期囊胚转换期，此期为母型调控向合子型调控过渡的时期，合子基因开始转录，细胞分裂变慢，细胞移动明显。胚胎细胞分三类：与卵黄接触的卵黄多核层(yolk syncytial layer, YSL) 细 胞、位于胚盘最外层的表胚层(enveloping layer, EVL)细胞和上述二者之 间的深层细胞(deep cells)。仅深层细胞发育为胚胎本体组织。 Midbla