基因工程1-基因工程导论课件.ppt

基 因 工 程 第一章 导 论 1.1 基因工程研究的内容及基本过程 基因（Gene）：是DNA分子的一个区段，是一个含有特定遗传信息的核苷酸序列，它是遗传物质的最小功能单位（多数情况下，它编码一种完整的多肽链）。 克隆（Clone）：作名词使用时，是指从一个祖先通过无性繁殖方法产生的后代（无性系），或具有相同遗传性状的DNA分子、细胞或个体所组成的特殊的生命群体。 作动词使用时，是指从同一个祖先生产这类同一的DNA分子群或细胞群的过程。 基因工程：是一项将一种生物的基因通过基因载体运送到另一种生物的活细胞中，并使之增殖（克隆）和行使正常功能（表达），从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。 基因工程是把外源DNA（片段）引入受体细胞进行扩增，实质上是从一个DNA片段增殖了结构和功能完全相同的DNA分子群的过程。所以基因工程也称为基因克隆（Gene Cloning）或分子克隆（Molecular Cloning）。 基因工程的基本过程： （1）取得目的基因。途径有二： ?从生物基因组中分离 ?人工合成 （2）在体外将带有目的基因的DNA片段，连接到能够自我复制 并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子。 （3）将重组DNA分子引入受体细胞（宿主细胞）。 （4）带有重组体的细胞扩增，获得大量的细胞繁殖群体（菌落）。 （5）从大量携带重组体DNA分子的宿主细胞中分离出携带目的基因的细胞。 （6）将选出的细胞克隆的目的基因进行进一步研究分析（亚克隆），并设法使之实现功能蛋白的表达。   特 点 ：  基因工程（分子水平） 诱变育种（群体水平） 原生质融合（细胞水平） 1.2 基因工程的诞生 现在人们公认，基因工程诞生于1973年。现代分子生物学领域理论上的三大发现及技术上的三大发明对基因工程的诞生起到了推动作用。 1.2.1 理论上的三大发现 第一 ：40年代发现了生物的遗传物质是DNA（而不是蛋白质）。早在1928年，F.Grifth 发现在肺炎球菌中存在着转化作用（transformation）： 1）S品系 小鼠 死  2）R品系 小鼠 活 3）S加热杀死 小鼠 活 4）将2）+3） 小鼠 死 Grifith认为那些加热杀死了的S型细菌的存在导致那些活的R型细菌发生转化作用。后来，T.Avery进一步弄清了转化因子的本质是（将S型的DNA加到R型培养物中，使R型转化为S型。）1934年， T.Avery 在美国的一次学术会议上报道了他的研究结果，证明了DNA是生物的遗传物质，也证明了DNA可以把一个细菌的性状转化给另一个细菌。但这一超越时代的科学成就在当时未得到公认，十年后才得到公开发表。现在认为， T.Avery 的工作是基因工程的先导。 第二：50年代弄清了DNA的双螺旋结构和半保守复制机理。  Walson 和Crick在1953年提出了双螺旋模型，认为基因是 DNA分子的一个区段，这一发现标志着分子遗传学的真正开始。 第三：60年代确定了遗传信息的传递方式。 1961年，Monod 和Jacob提出了乳糖操纵子学说，揭示了原核生物的基因调控机制。 以Nireberg等为代表的一批科学家，确定了遗传信息是以密码方式传递的，每三个核苷酸组成一个密码子，代表一个氨基酸。到1965年，全部破译了20种天然氨基酸的64个密码(1968年获Nobel奖) ，提出了遗传信息从DNA RNA 蛋白质的中心法则，神秘的遗传现象在分子水平上得到了揭示。 1.2.2 技术上的三大发明 第一：在细胞中发现了染色体外能自主复制的质粒。 第二：在大肠杆菌中发现了质粒转化系统（基因扩增、表达）。 第三：发现了工具酶。（1967年）DNA连接酶：参与DNA裂口的修复（缝纫针）（1970年）限制性核酸内切酶（手术刀）（1970年）逆转录酶：mRNA DNA，打破了中心法则，使真核基因的制备成为可能(1975年