谷氨酸棒状杆菌果糖代谢阻断工程菌的构建-食品科学.PDFVIP

※生物工程 食品科学 2016, Vol.37, No.21 157 谷氨酸棒状杆菌果糖代谢阻断工程菌的构建 1 2 1 1 1 1 1,* 1 许湄雪 ，王北辰，刘金雷，范 荣 ，陆 浩 ，韩武洋，李天明 ，冯惠勇 （1.河北科技大学生物科学与工程学院，河北 石家庄 050018 ；2.威斯康星大学，威斯康星 麦迪逊 53706 ，美国） 摘  要：谷氨酸棒状杆菌不仅可以利用葡萄糖和果糖作为碳源进行糖类代谢，也可以利用这些碳源作为底物生产 葡萄糖酸、甘露醇及山梨醇等产品。为了提高底物利用率和目的产物的积累量，利用代谢工程阻断糖类代谢的磷 - phosphoenolpyruvate carbohydrate phosphotransferase system PTS 酸烯醇式丙酮酸 糖磷酸转移酶系统（ ， ）和失活相 pts F 应磷酸激酶。是实现此目标的有效手段。本实验利用同源重组和反向筛选等技术手段，分别获得 单基因缺失工 CGΔpts F pts F pts H pts I CGΔpts FΔpts HΔpts I 程菌 和 、 、 三基因缺失工程菌 。工程菌的生长情况研究表明：在以葡萄糖 为唯一碳源的培养基上，工程菌CGΔpts F和工程菌CGΔpts FΔpts HΔpts I与野生型生长情况基本一致，说明葡萄糖代 3 CGΔpts F CGΔpts FΔpts HΔpts I 谢不受 个基因影响；在以蔗糖为唯一碳源的培养基上，工程菌 和工程菌 的生长速率分 别是野生型的48.4%和29.7%，菌体浓度分别是野生型的61.6%和34.1%；在以果糖为唯一碳源的培养基上，工程菌 CGΔpts F 43.2% CGΔpts FΔpts HΔpts I 0 菌体浓度是野生型 ，工程菌 生长为 ，证明其完全阻断了果糖代谢，同时说明果糖的 PTS pts F pts H pts I PTS 系统受 、 和 基因编码的 相关蛋白的联合控制。果糖代谢阻断工程菌的获得，为进一步构建以果糖 原型为底物的甘露醇或山梨醇生产工程菌株提供了遗传资源，也为谷氨酸棒状杆菌的糖类代谢研究提供了理论依据。 - 关键词：谷氨酸棒状杆菌；基因敲除；磷酸烯醇式丙酮酸糖磷酸转移酶系统 Construction of Engineered Strain of Corynebacterium glutamicum Capable of Blocking Fructose Metabolism 1