生物化学4抗体制药PPT.ppt

噬菌体抗体库的筛选：9天可完成3次筛选 对目的克隆进行表达和检测 噬菌体抗体库技术的特点： 能包含B细胞全部克隆，库容量大，可筛选到各种抗体 避开了人工免疫和杂交瘤技术，直接获得抗体基因 可获得高亲和力的人源化抗体 筛选得到的抗体更易于在大肠杆菌中表达 噬菌体抗体库为抗体工程发展的一个里程碑。 成功筛选出大量抗体，有些已经进入临床实验阶段 噬菌体抗体库还可用于抗体分子定向进化的筛选 新型抗体库技术： 选择性感染噬菌体展示抗体库技术 核糖体展示抗体库技术 4.6 抗体诊断试剂 抗体诊断药物基本分为三类： 血清学鉴定用的抗体试剂 免疫标记技术用的抗体试剂 体内导向诊断药物 一、血清学鉴定用的抗体试剂 血清学鉴定： 用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌诊断和血型鉴定。 基本原理： 抗体与抗原之间的凝集反应 （1）鉴定病原菌用的抗体试剂 诊断血清 162种 Vk1 一、嵌合抗体（chimeric antibody） 将鼠源单克隆抗体可变区和人抗体恒定区连接起来的抗体。 免疫原性大幅度降低。 保留抗原结合特异性。 构建过程： 提取杂交瘤细胞mRNA 反转录成cDNA RT-PCR分别扩增 VL、VH 基因 表达载体共转 染骨髓瘤细胞 分别与人的轻链、 重链恒定区基因相连 人-鼠嵌合抗体 15~16aa 二、改形抗体（reshaping antibody） 抗原结合区域： H和L链 V区中的互补性决定区 (CDR，complementarity determinant region) 将鼠源性单克隆抗体的CDR以外序列替换人 Ig分子中的序列，可基本消除免疫原性。 改型抗体也称CDR移植抗体 (CDR grafting antibody)。 15~16aa 构建过程： 分别RT-PCR克隆杂交瘤细胞H、L链可变区基因并测序 设计改形抗体可变区基因 化学合成可变区基因 表达载体共转 染骨髓瘤细胞 分别与人的轻链、 重链恒定区基因相连 改形抗体 15~16aa 问题： 抗体亲和力下降 原因： 骨架区（FR, frame region）影响CDR的空间结构。 提高亲和力： 从已知人可变区数据库中选择骨架区与鼠抗骨架区同源性最高的序列 骨架区内可能影响抗原结合的氨基酸残基替换为鼠抗残基：立体结构数据、结构预测、分子设计推测 合适保留CDR两侧骨架区序列 大都涉及VL、VH相互作用以及与CDR接触 选择性保留可变区N末端的数个氨基酸残基 N末端与CDR表面相距很近，可能参与抗原结合 三、镶面抗体（resurfacing antibody） 抗体可变区表面暴露的氨基酸残基位置和数量非常保守，不因种属和型别改变。 为免疫原性主要来源 将鼠抗可变区表面暴露的骨架区氨基酸残基改为相应的人源残基，使可变区表面人源化。 消除异源性，保持单抗特异性和亲和力。 四、小分子抗体 Fab片断（fragment of antigen binding） 完整轻链和重链Fd段（单价） 完整抗体的1/3 木瓜蛋白酶水解抗体 重组方式生产 抗原特异性、制作简单 Fv与单链抗体（single chain Fv，ScFv ） （1）Fv （可变区片断） VL、VH非共价键结合（单价） 完整抗体的1/6 基因工程重组生产 易解离 （2）ScFv 常用连接肽：(Gly4Ser)3 优点： 分子量小（1/6），免疫原性低 容易进入瘤体组织 无Fc，免疫诊断成像清晰，本底低 单链容易改造 可采用大肠杆菌大量生产 缺点： 单价，亲和力下降 半衰期短