第二章 蛋白质PPT.ppt

电泳 带电粒子在电场中移动的现象称为电泳.（electrophoresis） 。 What’s electrophoresis? 某蛋白质pI=3.5，电泳缓冲液pH=5.0，通电后该蛋白质向正极还是负极移动？ 二、蛋白质的胶体性质 蛋白质是高分子化合物，直径为1~100nm。 1、亲水胶体稳定因素： 1）、蛋白质表面的水化膜 2）、电荷的排斥作用 + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 在等电点的蛋白质 水化膜 + + + + + + + + 带正电荷的蛋白质 － － － － － － － － 带负电荷的蛋白质 不稳定的蛋白质颗粒 酸 碱 酸 碱 酸 碱 脱水作用 脱水作用 脱水作用 蛋白质胶体颗粒的沉淀 （三）、蛋白质的变性与沉淀 1.蛋白质的变性 (denaturation) 在某些理化因素作用下，蛋白质的空间构象破坏，导致其理化性质的改变和生物活性的丧失 。 变性的实质：主要是次级键和二硫键的破坏 变性的因素：加热、紫外线、超声波、剧烈震荡；有机溶剂、强酸、强碱、重金属盐、生物碱试剂。 N 末端：多肽链中有自由氨基的一端 C 末端：多肽链中有自由羧基的一端 多肽链有两端 * 多肽链(polypeptide chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。 读写方向：N C 肽链结构 ㈡ 生物活性肽 谷胱甘肽(glutathione, GSH) N端 C端 蛋白质的分子结构包括 ： 一级结构(primary structure) 二级结构(secondary structure) 三级结构(tertiary structure) 四级结构(quaternary structure) 空间结构 蛋白质的分子结构 The Molecular Structure of Protein 蛋白质分子的结构层次 Lys Gly Leu Val Ala His Amino acids Lys Ala Arg Met Glu Leu 肽键 （三）蛋白质的一级结构primary structure 定义 蛋白质分子中氨基酸的排列顺序。 化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。 N末端 C末端 牛核糖核酸酶的一级结构 病例：镰型红细胞贫血 蛋白质的空间结构以一级结构为基础。 蛋白质一级结构改变，其空间结构易改变！ 蛋白质一级结构影响着蛋白质的生理功能！ 镰形红细胞贫血病因 N-val · his · leu · thr · pro · glu · glu · · ·C(146) HbS β 肽链 HbA β 肽 链 N-val · his · leu · thr · pro · val · glu · · ·C(146) 这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。 多肽链的氨基酸序列分析 测序前的准备 N端分析以确定蛋白质的多肽链数目 断裂二硫键 分离单一多肽链 测定多肽链的氨基酸组成 多肽链氨基末端与羧基末端分析 二硝基氟苯（1-fluoro-2,4-dinitrobenzene）法 丹酰氯 (dansyl chloride)法 多肽链的氨基酸序列测定和重叠组合 对多肽链进行限制性水解成小片段 Edman降解法进行小片段肽段的序列分析 对各片段序列进行比较叠加，拼出完整的多肽序列 蛋白质肽链的局部空间结构，即各段肽链主链原子的空间分布状态，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。 定义 化学键：氢键 ㈠ 蛋白质的二级结构 secondary structure 二、蛋白质的空间结构 肽链结构 主链 侧链 侧链 侧链 侧链 1．形成二级结构的基础 肽单元(peptide unit) ： 肽键中的C、O、 N、H四个原子和相邻的两个α碳原子处在同一个平面上 。 2.蛋白质二级结构的主要构象 ?-螺旋 ( ? -helix ) ?-折叠 ( ?-pleated sheet ) ?-转角 ( ?-turn ) 无规卷曲 ( random coil ) （1）?-螺旋(?-helix) 氢键 氢键 （2）?-折叠（?-pleated sheet） 氢键 （3）?-转角和无规卷曲 ?-转角 无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部