第十三章 生化药物和基因工程药分析概论.ppt

第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概论 ;基本要求; 一、防病、治 病的三大药源; 1．生化药物： 例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。;2. 基因工程药物： 以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。;DNA重组技术（基因工程）：生产过程为; 三、特点 1. 生物体的基本生化成分  2. 分子量大: 分子量测定  3. 结构难确证  4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、 最终产品 5. 生物活性检查; 6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定： 理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分 的生物活性; 生化药物和基因工程药物质量控制的项目：  来源与种类 纯度 性状 干燥失重或水分 鉴别 炽灼残渣 氨酸组分分析 热源试验 肽图 生物活性 糖含量 含量分析 ;肽图检查法：系通过蛋白酶或化学物质裂解蛋白质后，采用适宜的分析方法鉴定蛋白质一级结构的完整性和准确性。 第一法：胰蛋白酶裂解-反相高效液相色谱法； 第二法：溴化氰裂解-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法。;大肠杆菌菌体蛋白残留量测定法：本法系采用酶联免疫法测定大肠杆菌表达系统生产的重组制品中残留菌体蛋白含量。 酵母工程菌菌体蛋白残留量测定法：本法系采用酶联免疫法测定酵母表达系统生产的重组制品中残留菌体蛋白含量。 假单胞菌菌体蛋白残留量测定法：本法系采用酶联免疫法测定假单胞菌表达系统生产的重组制品中残留菌体蛋白含量。; ;（一）理化鉴别法 1.化学鉴别法： 例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显色; 2.紫外分光光度法 溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml 判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。 3. HPLC法： 利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留 时间和肽图谱的一致性进行鉴别。 ; 4.酶法： 例：尿激酶的鉴别---气泡上升法 原理：; 方法： 取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小时内不溶。 ;5. 电泳法：以肝素鉴别为例。; 6. 生物法： 利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。 利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。; 二、杂质检查 一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析 生产过程中杂质的检查 1. 原料药纯度分析： 多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析， 具有一定活性的其他有关酶的检查。;例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查 选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5%（g/g）。1:1000=x:50 x=0.05（mg） L=0.05/1=5%  2. 生产过程中杂质的检查; 三、安全性试验 热源试验  异常毒性试验 :急性毒性物质  过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组 胺、类组胺;