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医学论文-针刺对脑缺血大鼠神经元凋亡的影响 【摘要】? 目的 观察针刺对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后海马神经元内细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)和神经元凋亡的影响。方法 大脑中动脉线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型，再灌后针刺大鼠，应用免疫组化、免疫印迹法和流式细胞计数法分别检测CDK4和细胞凋亡。结果 缺血组再灌注48h后海马CDK4表达升高，凋亡细胞增多，针刺组CDK4表达和凋亡细胞明显减少(P0.01)。结论 针刺对脑缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与调控细胞周期因子从而抑制凋亡有关。 【关键词】? 针刺;脑缺血;细胞周期;凋亡 　　ABSTRACT：Objective To investigate the effects of acupuncture on expression of CDK4 protein in neurons and neuronal apoptosis after focal cerebral ischemia reperfusion in rats.Methods A model of middle cerebral artery occlusion(MCAO) in rats was established with intraluminal filament occlusion.Acupuncture was conducted on rats after reperfusion.The immunohistochemistry,western blot and flow cytometry were used respectively to detect the expression of CDK4 protein and neuronal apoptosis in hippocampus.Results A significant increase in CDK4 immunostaining and apoptotic neurons was detected at 48h after reperfusion.The differences of immunoreactivity of CDK4 and apoptotic neurons between ischemic group and acupuncture group were significant(P0.01).Conclusion Acupuncture can protect cerebral tissues by regulating cell cycle factors and inhibiting cell apoptosis in ischemia reperfusin injury. 　　KEY WORDS：Acupuncture;Cerebral ischemia;Cell cycle factor;Apoptosis 　　海马与学习、记忆、动机及情绪等功能密切相关。局灶性脑缺血可损伤远隔部位的海马出现神经元丢失及神经胶质细胞增殖[1]，形成一种类似海马硬化的病理改变。海马神经元丢失是引发认知障碍的基础病理变化之一[2]。针刺对脑缺血再灌注损伤有保护作用。在脑缺血再灌注损伤中，细胞周期与神经元凋亡有着密切的关系。本研究旨在探讨针刺是否通过对细胞周期的调控发挥抗凋亡作用。 　　1 材料和方法 　　1.1 试验动物和分组 　　成年健康雄性SD大鼠36只，体质量200～250g，清洁级，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。随机分为对照组、缺血组和针刺组，每组12只。 　　1.2 大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型的建立 　　参照Koizumi等[3]方法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞及再灌注模型。采用10%水合氯醛(0.3ml/100g)麻醉, 术中维持动物肛温(36.6±0.5)℃，颈部正中切口，分离并结扎左侧颈总动脉、颈外动脉,注意避免刺激迷走神经。从颈总动脉分叉处插入4.0丝线,沿颈内动脉进入距颈总动脉分叉处1.8～2.0cm略感阻力时停止;30min后拔出丝线进行缺血再灌流。术后在约20℃的空调环境下单笼饲养,自由进食、进水。对照组只暴露血管。 　　1.3 针刺方法 　　按照《实验针灸学》[4]，取水沟、内关、曲池、足三里4穴，强刺激手法，交替行针5min。再灌后开始，2次/d。 　　1.4 标本采集和处理 　　再灌48h后断头取脑，各组取6份-8℃冰箱冻存备用做Westernblot和流式细胞仪检测，另外6份常规灌注固定，石蜡包埋，切片做免疫组化检测。 　　1.5 Westernblot检测 　　海马样品制备、蛋白浓度测定、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳以及转移电泳，最后进行化学发光法显影