鲫源嗜水气单胞菌毒力基因多重PCR检测及ERIC-PCR分子分型 Multiplex PCR and ERIC-PCR genotype in virulence genes of Aeromonas hydrophila in Crucian carp.pdfVIP

第36卷第6期 海 洋 渔业 Vol_36．No．6 2014年11月 hhrineFisI地fi髓 Nov一2014 文章编号：1004—2490(2014)06—0549—08 鲫源嗜水气单胞茵毒力基因多重PCR 检测及EⅪC．PCR分子分型 符贵红1，肖 丹2，胡鲲3，杨先乐3 (1．中国水产科学研究院东海水产研究所，农业部东海与远洋渔业资源开发利用实验室，上海200090； 2．湖北省武汉市黄陂区水产技术推广站，武汉430300；3．上海海洋大学水产与生命学院， 国家水生动物病原库，上海201306) 摘要：为快速了解鲫源嗜水气单胞菌株毒力基因携带情况及与菌株基因型的相关性，建立多重PcR法和 ERIc—PcR分子分型，为临床快速检测、菌株分型和菌株致病性分析提供依据。通过单重PCR法检测出标准 entemtoxin，Ⅱff)、胞外蛋白酶(exlracellular cellsofexcitatory pmtease，n和)和细胞肠兴奋性肠毒素(intestinal entemtoxin，nc￡)，其扩增产物长度依次为300bp、592bp、442bp、856bp和500bp。在此基础上，优化并建立特 异性高，敏感度达7．2×102cfu·mL。多重PcR法，用于检测从江苏射阳地区患病水产动物体内分离的17株 嗜水气单胞菌5个毒力基因携带率。结果显示，毒力基因oc￡的携带率为loo％，而80％的菌株5个毒力基因 均有检出。采用ERlc—PcR分子分型技术，以标准菌株ATcc7966为对照，对17株鲫源致病性嗜水气单胞菌 进行基因分型，获得两种基因型，分别描述为A型和B型，其中B型菌株14株，带型与ATcc7966一致，认为 是当地的主要流行株。探究菌株基因型与毒力基因分布相关性，携带5个毒力基因的均为B型菌株，而所有 A型菌株存在一或多个毒力基因缺失，有可能是此类菌株更易发生毒力基因漂变，但还需进一步研究。 关键词：嗜水气单胞菌；毒力基因；ERIc—PcR；分子分型 中图分类号：S94l 文献标识码：A 义。与传统检测方法相比，以嗜水气单胞菌5个 嗜水气单胞菌(Aero脚凡os危州九Dp蒯n)隶属气 主要毒力基因作多重PcR的方法更为快速、准 单胞菌科(Aennonadaceae)气单胞菌属 (Aero，加凡os)‘1。，是一种革兰氏阴性菌，为人、畜及确、可靠，能有效避免误检、漏检，适用于大规模 水生动物共患致病菌。国内外学者对嗜水气单 流行病学研究样本检测。 胞菌致病机理研究表明该菌致病性与气溶素 对病原菌溯源，分析其流行规律是流行病学 研究的重要方面，同时也是建立有效防控措施的 (aerolysin，口er)、溶血素(hemolysin，^万)、细胞毒 entemtoxin，。如)、胞外蛋白酶基础。而分子分型能从遗传学角度准确分析菌 性肠毒素(cytotoxic 株间亲缘关系，是目前病原菌分析溯源的重要手 (eXtracellularpmtease，n如)和细胞肠兴奋性肠毒 cellsof enterotoxin，nc￡)等段。。其中，肠杆菌重复序列PCR法(ERIC— 素(intestinalexcitatory 多种毒力基因有着密切关联。2一。。同时，这些毒 PCR)作为一种半随机扩增多态DNA法，优于其 力基因均为嗜水气单胞菌的重要保护性抗原 它分子分型方法，具分型率较高、可比性强、准确 [4‘6 1。因此，嗜水气单胞菌毒力基因的检测在致 性好、可重复性高等优点，被广泛应用于多种人