生物信息的传递 Transcription——从DNA到RNAPPT.ppt

第三章 生物信息的传递（上） Transcription——从DNA到RNA;;;;;;生物体内有三种RNA;● 基本概念 ● 转录起始：RNA聚合酶、启动子 ● 转录的基本过程 ● 转录后加工 ● 原核生物与真核生物mRNA的特征比较 ● RNA合成与DNA合成异同点;一、基本概念与基本特征;参与转录的物质;转录的不对称性：;;;模板链并非永远在同一条单链上;;转录单元（transcription unit）;（一） RNA聚合酶 （二） 启动子(promoter);（一） RNA聚合酶;;σ亚基：识别启动子，起始转录。σ亚基和其他肽链的结合不很牢固，易脱离全酶。 核心酶：全酶脱离σ亚基剩下的β‘βα2ω称为核心酶。核心酶本身就能催化核苷酸间磷酸二酯键的形成。 β亚基：是酶和底物结合的部位和催化位点。利福平(rifampicin)和利福霉素(rifamycin)通过结合β亚基，对全酶有强烈的抑制作用，抑制RNA合成的起始，但不抑制其延长。β亚基基因rpoB突变可使细菌对利福平有抗性。链霉溶菌素(streptolydigin)能抑制RNA链的延长，rpoB突变却可使细胞对链霉溶菌素亦发生抗性。;β’亚基：其作用是与模板DNA相结合。β’亚基的碱性较强，适于与模板DNA相结合。肝素是一种多价阴子，能和β’亚基结合，从而抑制DNA与RNA聚合酶相结合，进一步抑制转录作用。 α亚基：功能现尚未知。然而，当噬菌体T4感染E.coli时，其α亚基即在精氨酸上被ADP-核糖化。这种修饰作用使该RNA聚合酶全酶对其原先识别的启动子的亲和力减弱。所以有人认为，α亚基的功能可能是识别其相应的启动子。;大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析;原核生物RNA聚合酶的作用;2. 真核生物RNA聚合酶;酶;;　　RNA聚合酶Ⅰ的活性最显著。位于核仁中，负责转录rRNA基因(rDNA)，细胞内绝大部分是rRNA。其活性不被α-鹅膏蕈碱所抑制。 RNA聚合酶Ⅱ位于核浆中，负责hnRNA的合成。hnRNA是mRNA的前体。其活性可被低浓度的α-鹅膏蕈碱所迅速抑制， RNA聚合酶Ⅲ负责合成tRNA和许多小的核内RNAs。聚合酶Ⅲ对α-鹅膏蕈碱的反应则不尽相同：在动物细胞中聚合酶Ⅲ可被高浓度α-鹅膏蕈碱所抑制，而在酵母和昆虫细胞中则不会被抑制。;RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别;某些常用的转录抑制剂 ;（二） 启动子(promoter);原核生物启动子特性; RNA聚合酶能否与启动子相互作用是起始转录的关键问题。 不同启动子对RNA聚合酶的亲和力各不同。可能对调控转录起始的频率，即对基因表达的程度有重要不同。 ;　　一类是RNA聚合酶可以直接识别的启动子。这类启动子应当总是能被转录。但实际上也不都如此，外来蛋白质可对其有影响，即该蛋白质可直接阻断启动子，也可间接作用于邻近的DNA结构，使聚合酶不能和启动子结合。 另一类启动子在和聚合酶结合时需要有蛋白质辅助因子的存在。这种蛋白质因子能够识别与该启动子顺序相邻或甚至重叠的DNA顺序。;　　为什么RNA聚合酶能够仅在启动子处结合呢? RNA聚合酶分子上可能有一个活性中心能够识别出DNA双螺旋上某特异序列的化学结构； 启动子处的核苷酸顺序具有特异的形状以便与RNA聚合酶结合，就好像酶与其底物的结构相恰恰适合一样。;　　利用“足迹法”和测序技术，对100多种启动子的顺序进行了比较，发现在RNA合成开始位点的上游大约10bp和35bp处有两个共同的顺序，称为-10和-35序列。这两个序列的特征如下： -35区：T85T83G81A61C69A52 （-35序列, TTGACA区） -10区：T89A89T50A65A65T100 （-10序列,TATA区） 大多数启动子均有共同顺序(consensus sequence)，只有少数几个核苷酸的差别。共同顺序是启动子的关键部位。;启动子的共同顺序; ;-35序列是RNA聚合酶全酶的识别位点，对全酶有很高的亲和性。 如果-35序列发生突变或缺失，将大大降低对全酶的亲和性，即降低RNA聚合酶与启动子的结合速度，但不影响转录起始位点附近DNA 双链的解开。 ; ;大肠杆菌RNA聚合酶全酶所识别的启动子区;典型启动子的结构; 原核生物亦有少数启动子缺乏这两个序列（-35和-10)之一。在这种情况下，RNA聚合酶往往不能单独识别这种启动子，而需要有辅助蛋白质的帮助。;E.coli RNA聚合酶与启动子结合的过程可分为两步： ①酶识别启动子，并与其结合形成“关闭”复合体(即双螺旋形式)。这一步所识别的是-35序列。 ②“关闭”复合体转变为“开放”复合体(即双螺旋解旋，两