色谱分析导论PPT.ppt

1 6.1 色谱法及其分类 第六章 色谱分析导论 6.2 色谱流出曲线与基本术语 6.3 色谱分析基本原理 2 6.1 色谱法及其分类 6.1.1 色谱法 6.1.2 色谱法分类 3 6.1.1 色谱法 色谱法（Chromatography）是一种分离分析方法。 它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质在两相中进行多次反复分配，从而达到分离的目的。 色谱法是混合物最有效的分离、分析方法。 4 色谱法早在1906年由俄国植物学家茨维特（M. Tswett）分离植物色素时采用。 将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果植物叶色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带。 这种方法因此得名为色谱法。 6.1.1 色谱法 5 然后将潮湿的碳酸钙挤出玻璃管，用刀将各色带切下，对其中的组分用合适的分析方法分别进行测定。这是经典色谱法，各色素的分离过程与其含量测定过程是离线的，不能连续进行。 以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义，但仍被人们沿用至今。 6.1.1 色谱法 8 6.1.2 色谱法分类 二、按分离原理分类 根据组分在固定液（固定相）中溶解度的大小而分离。 气液色谱和液液色谱均属于分配色谱。 1、分配色谱（Partition Chromatography ） 9 6.1.2 色谱法分类 2、吸附色谱（Adsorption Chromatography） 根据组分在吸附剂（固定相）上的吸附和解吸能力的大小而分离。 气固色谱和液固色谱均属于吸附色谱。 10 6.1.2 色谱法分类 4、尺寸排阻色谱 利用大小不同的组分分子在多孔固定相中的选择渗透而分离 3、离子交换色谱 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而分离。 5、亲和色谱 利用不同组分与固定相的高专属亲和力进行分离。常用于蛋白质的分离。 11 6.1.2 色谱法分类 三、按固定相的形式分类 固定相在柱内的称为柱色谱 1、柱色谱（Column Chromatography） 填充柱色谱：固定相填充满玻璃或金属管中。 开管柱色谱：固定相固定在管内壁，又称毛细管柱色谱。 12 6.1.2 色谱法分类 2、平板色谱（Plate Chromatography） 纸色谱：以吸附水分的滤纸作固定相 薄层色谱：以涂敷在玻璃板上的吸附剂作固定相 13 6.2 色谱流出曲线与基本术语 6.2.1 色谱流出曲线 6.2.2 色谱基本术语 6.2.3 柱内组分的浓度分布 6.2.4 色谱流出曲线的意义 14 样品混合物在流动相的带动下经过固定相，并与固定相发生作用； 由于各组分与固定相相互作用的类型、强弱有差异，因此同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。 6.2.1 色谱流出曲线 15 各组分先后流出柱子，进入检测器，从而使各组分浓度的变化转变成电信号，然后用记录仪记录，得到由许多峰形组成的色谱图。 图中每个峰代表样品中的一个组分，峰面积代表该组分的含量。 6.2.1 色谱流出曲线 邻苯二胺、间苯二胺、对苯二胺的色谱分离图 17 6.2.1 色谱流出曲线 18 1.基线 无试样，仅有纯流动相通过检测器时，检测到的信号即为基线。 6.2.2 色谱基本术语 峰高 基线 稳定的基线应该是一条水平直线。 19 2. 峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离。 6.2.2 色谱基本术语 20 3.保留值 （1）时间表示的保留值 保留时间(tR)：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间； 死时间(tM)：不与固定相作用的物质 (如空气)的保留时间； 6.2.2 色谱基本术语 调整保留时间（tR ＇）：tR＇= tR－tM 21 （2）用体积表示的保留值 保留体积（VR）： VR = tR×qv qv为柱出口处的载气流量，用皂膜流量计测出。 单位：m L / min。 6.2.2 色谱基本术语 调整保留体积(VR ＇)： V R＇ = VR －VM 死体积（VM）： VM = tM ×qv 22 4. 相对保留值r21 组分2与组分1调整保留值之比： r21 = t´R2 / t´R1 = V´R2 / V´R1 相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。 6.2.2 色谱基