第六章节 酶、细胞、原生质体固定化.pptVIP

第六章 酶、细胞、原生质体固定化 第一节 引 言 酶是一类由生物细胞产生的具有催化功能的蛋白质，作为一种生物催化剂，酶参与生物体内的各种代谢反应，而且反应后其数量和性质不发生变化。酶在常温常压的温和条件下能高效地催化反应(比一般催化剂的效率高出107-1013倍)，并具有很高的专一性，许多难以进行的有机化学反应在酶的催化下都能顺利地进行，而且可以减少或避免副反应。酶的这些优点大大促进了人们对酶的应用和酶技术的研究，酶被人们广泛应用于酿造、食品、医药等领域；特别是近年来，由于生物化学的发展，酶的作用机制日益明了，新的酶源不断开发，酶的应用更加活跃起来。 酶是一种由氨基酸组成的蛋白质，其高级结构对环境十分敏感，各种因素如物理因素(温度、压力、电磁场)、化学因素 (氧化、还原、有机溶剂、金属离子、离子强度、pH)和生物因素(酶修饰和酶降解)均有可能使酶丧失生物活力。即使在酶反应的最适条件下，酶也会失活，随着反应时间的延长，反应速度会逐渐下降，反应后不能回收，只能采用分批法进行生产等，这说明对于现代工业来说，酶还不是一种理想的催化剂。 怎样才能获得理想的生物催化剂?各国学者为之努力工作。如果能设计一种方法，将酶束缚于特殊的相，使它与整体相(或整体流体)分隔开，但仍能进行底物和效应物(激活剂或抑制剂)的分子交换。这种固定化的酶可以像一般化学反应的固体催化剂一样，既具有酶的催化特性，又具有一般化学催化剂能回收、反复使用等优点，并且 生产工艺可以连续化、自动化。20世纪50年代发展起来的固定化技术正是基于这一目的发展起来的。随着固定化技术的发展，作为固定化的对象不仅有酶，也可以有微生物细胞或原生质体，这些固定化物可统称为固定化生物催化剂。固定化生物催化剂在节能，降低成本，保护环境，生产自动化、连续化等许多方面都是十分有利的，它为酶的应用开拓了广阔的前景。 经过40多年的研究和发展，酶固定化技术取得了长足的进步。它不仅在理论研究(如阐明酶作用机理)上发挥独特作用，在实际应用上也显示出强大威力。用这种技术不仅能稳定酶、改变酶的专一性、提高酶活力，从而改善酶的种种特性，使之更符合人类要求，而且还能创造适应特殊要求的新 酶。在酶、细胞和原生质体的固定化方面，先后开发了多种固定化方法和性能多样的载体材料。精巧设计的固定化生物催化剂反应器可实现生产工艺的自动化操作，从而大大降低成本。固定化酶在食品、医药、化工和生物传感器制造上都有成功的应用实例。然而，真正投入工业化应用的固定化酶却不多，原因是固定化使用的试剂和载体成本高、固定化效率低、稳定性差、连续操作使用的设备比较复杂。进一步开发更简便、更适用的固定化方法以及性能更加优异的载体材料，使更多的固定化酶和细胞取得工业规模应用，仍然是这个领域追求的目标。 第二节 酶的固定化 固定化技术的应用可追溯到20世纪50年代，人们通过有目的地将酶包裹于聚合基质或连接于载体分子而限制酶的移动；也可采用酶的交联，通过蛋白质交联或无活性材料的加入，从而产生了无数用不同材料的固定方法；连接于合成材料载体显示出更多的优越性；最近交联酶晶体的报道给人们提供了一种新的选择。 固定化酶依不同用途有颗粒、线条、薄膜和酶管等形状。颗粒状占绝大多数，它和线条主要用于工业发酵生产，薄膜主要用于酶电极。酶管机械强度较大，主要用于工业生产。 实验研究发现固定化对酶活性可产生不同影响，和可溶性酶比较会出现酶活力的降低或升高两种情况。例如，交联的枯草杆菌蛋白酶晶体水解氨基酸酯的活力比可溶性酶低96.4％。然而，使用固定化的脂肪酶或酶制备物在溶剂中合成酯，其活力比酶粉增加40倍。目前，人们对固定化酶极感兴趣，因为其性质比可溶性酶及其相关技术优越，对固定化酶的利用也与日俱增。 一、固定化酶的定义 固定化酶是20世纪50年代开始发展起来的一项新技术，最初是将水溶性酶与不溶性载体结合起来，成为不溶于水的酶的衍生物，所以曾叫过“水不溶酶” (water insoluble enzyme)和“固相酶”(solid phase enzyme)。但是后来发现，也可以将酶置于超滤装置中，高分子底物与酶在超滤膜一边，而反应产物可以透过 膜逸出，在这种情况下，酶本身仍处于溶解状态，只不过被固定在一个有限的空间内不能再自由流动。因此，用水不溶酶或固相酶的名称就不恰当了。在1971年第一届国际酶工程会议上，正式建议采用“固定化酶”(immobilized enzyme)的名称。 所谓固定化酶，通过物理的或化学的方法，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶束缚于一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但仍能发挥催化作用的酶。因此，不管用何种方法制备的固定化酶，都应该满足上述固定化酶的条件。例如，将一种不能透过高分子化合物的半透膜置入容器内