第二章 紫外-可见分光光度法 现代食品检测技术 教学课件.pptVIP

现代食品检测技术 第一节 紫外-可见吸收光谱分析基本原理 1.概述 紫外－可见吸收光谱：分子价电子能级跃迁。 波长范围：100～750 nm. (1) 远紫外光区: 100～200nm (2) 近紫外光区: 200～400nm (3)可见光区:400～750nm 可用于结构鉴定和定量分析。 电子跃迁的同时，伴随着振动转动能级的跃迁;带状 光谱。 2、吸收曲线 λ：吸收波长；ε：摩尔吸光系数 1、次峰 2、肩峰 3、波谷 4、最大吸收峰 用不同波长的单色光照射，测吸光度； 吸收曲线 吸收曲线 3.电子跃迁与分子吸收光谱 能级跃迁 讨论： 讨论： 第二节 紫外可见吸收光谱与分子结构的关系 1　σ→σ＊跃迁 2　n→σ＊跃迁 3 π→π＊跃迁 4、吸收带 （1）K吸收带：由π→π＊跃迁产生的，由于 分子中存在π→π＊共轭结构而引起的,εmax大 于104L·mol－1·cm－1，强吸收带。吸收峰 在217-280nm，共轭体系越大，吸收波长越长， 吸收强大增大。 （2）R吸收带：由n→π＊跃迁产生的，100＜ ε＜1000，弱吸收。吸收峰在近紫外区。 （3）B吸收带：由芳香族化合物的π→π＊跃迁和苯 环的振动的重叠引起的，是一组精细结构吸收带，吸 收峰在230-270 nm之间，?=100，B吸收带的精细结构 常用来判断芳香族化合物，但苯环上有取代基且与苯 环共轭或在极性溶剂中测定时，这些精细结构会简单 化或消失。 （4）E吸收带：由芳香族化合物的π→π＊跃迁产生 的，是芳香族化合物的特征吸收。 三、影响紫外可见吸收光谱的因素 1.共轭效应 共轭效应使吸收的波长向长波方向移动，吸 收强度也随之加强。 2.助色效应 助色效应使助色团的n电子与发色团的?电子共轭，结果使吸 收的波长向长波方向移动，吸收强度随之加强。 C=C 发色基团， 但 ? → ?*?200nm。 ?max=162nm 助色基团取代? → ?*（K带)发生红移。 3.超共轭效应 这是由于烷基的σ键与共轭体系的?键共轭而引起的，其效 应使吸收的波长向长波方向移动，吸收强度加强。但增加的幅 度很小。 4.溶剂的影响 常用溶剂有己烷、庚烷、环己烷、二氧杂几烷、水、乙醇等 等，特别是极性溶剂，对溶质吸收峰的波长、摩尔吸光系数， 形状都可能产生影响，这是因为溶剂和溶质间常形成氢键，或 溶剂的偶极使溶质的极性增强，引起? → ?*或n→π＊吸收带 的迁移。 饱和烷烃的分子只有σ→σ＊跃迁，吸收光谱 出现在远紫外区； 吸收波长λ200 nm； 只能被真空紫外分光光度计检测到；作为溶 剂使用。 第三节 紫外-可见分光光度计 一、基本组成 二、分光光度计的类型 一、基本组成 2.单色器 3.样品室 二、分光光度计的类型 光路图 第四节 紫外-可见吸收光谱的应用 一、定性分析 ?max：化合物特性参数，可作为定性依据； 1 吸收曲线比较法 吸收峰的数目，形状， λmax, εmax等。?max ， ?max都相同，可能是一个化合物； 1)与标准谱图比较 标准谱图库：46000种化合物紫外光谱的标准谱图 ?The sadtler standard spectra ,Ultraviolet? 2) 与标准化合物的吸收光谱比较 3. 可获得的结构信息 三、定量分析： 1、朗白—比耳定律 当用一束强度为Io的单色光垂直通过厚度为b、吸光 物质浓度为C的溶液时，溶液的吸光度正比于溶液的厚 度b和溶液中吸光物质的浓度C的乘积。数学表达式 为：A=lg(I0/I)=-lgT=KbC T：透光率 透过光强度与入射光强度的比值 （1）比例常数K的几种表示方法： 比例常数表示吸光物质对某波长光的吸收程度。与吸 光物质的性质、入射光的波长及温度等因素有关。 K值随着b和C的单位不同而不同。 1）．吸光系数： 当溶液浓度c的单位为g/L,溶液液层厚度b的单位为 cm时，K叫“吸光系数”，用a表示，其单位为L/g·cm， 此时： A=abC 由式可知：a=A/bc，它表示的是当c=1g/L、b=1cm时 溶液的吸光度。 2）．摩尔吸光系数： 当溶液浓度c的单位为mol/L，液层厚度b的单位为cm 时，K叫“摩尔吸光系数”，用ελ表示，其单位为 L/mol·cm，此时： A=ελbc ελ=A/bc， 它表示的是当C=1mol/L，b=1cm时，物质对波 长为λ的光的吸光度。 ελ与a之间的关系为： ε