2.1微生物的实验室培养导学案.docVIP

专题二 课题1 微生物的实验室培养 使用2018.1.10 班级 姓名 小组 【复习目标】 1.了解培养基、消毒、灭菌等基础知识； 2.理解无菌技术的操作。 【自主预习】 一、培养基 1．概念：人们按照微生物对__营养物质 _的不同需求，配制出的供其_生长繁殖__的营养基质。 2.种类：按照培养基的物理性质划分 （1）_液体__培养基：配制成的__液体___状态的基质。 （2）__固体__培养基：在__液体___培养基中加入___凝固剂__，如琼脂后，配制成的____固体___状态的基质，是实验室中最常用的培养基之一，微生物在其上面生长，可形成肉眼可见 的___菌落___。 3.组成成分：各种培养基的具体配方 不同__，但一般都有__水___、__碳源___、_氮源__、_无机盐___，此外培养基还需要满足微生物生长对___PH___、_特殊营养物质__ 以及__氧气___的需求。 二、无菌技术 获得纯净培养物的关键是___防止外来杂菌的入侵__。 1．消毒是指使用较为温和_____的物理方法或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分__ __对人体有害___的微生物（不包括__芽孢__和__孢子____）。实验室常用的消毒方法有____煮沸消毒法___、__巴氏消毒法___、____化学药剂消毒法____。 2.灭菌是指使用____强烈_____的理化因素杀死___物体内外所有____的微生物，包括__芽孢___和___孢子__。常用的灭菌方法有____灼烧灭菌___、__干热灭菌__、___高压蒸汽灭菌____。 3.实验操作中避免杂菌的污染，主要包括四方面的内容： （1）对实验操作的__空间____、操作者的___衣着和手_____进行清洁和消毒。 （2）将用于微生物培养的__器皿__、___接种用具____和___培养基____等进行灭菌。 （3）为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在____酒精灯火焰____附近进行。 （4）实验操作时应避免___已经灭菌处理____的材料用具与周围物品相接触。 4.在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被_____微生物污染____。使用后的培养基丢弃前一定要进行___灭菌__处理，以免污染环境。 三、分离纯化大肠杆菌 本实验使用的培养基为___牛肉膏蛋白胨___培养基。进行大肠杆菌的纯化培养，可分为 _制备培养基___和___纯化大肠杆菌___两个阶段。 1.制备培养基的一般步骤为：__计算___、__称量___、__溶化__、__灭菌_、_倒平板__。 2.纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是__平板划线法___和____稀释涂布法____。 （1）平板划线法通过___接种环___在琼脂固体培养基表面连续___划线__的操作，将___聚集__的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。 （2）稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的___梯度稀释___，然后将不同稀释度的菌液___分布涂布__到琼脂固体培养基的表面，进行培养。 3.菌落的概念：__由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体___。 4.结果分析： （1）如果接种了大肠杆菌的培养基上生长的菌落颜色、形状、大小基本一致，说明____接种符合要求____； （2）若培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中___有杂菌未消化__； （3）未接种大肠杆菌的空白对照的培养基在培养过程中若长出菌落，则说明_培养基灭菌___不彻底，实验失败。 四、菌种保存 1.对于频繁使用的菌种，可以采用___临时保藏__的方法。 （1）过程：首先将菌种接种到试管的___固体斜面培养基上__，合适温度下培养，菌落长成后，放于____4℃__冰箱中保藏，每隔3—6个月，都要将菌种从旧的培养基上转移到新的培养基上。 （2）缺点：保存时间___短___，菌种容易被___污染___或产生__变异____。 2.对于需要长期保存的菌种，可以采用___甘油管藏___的方法，将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混匀于__-20℃___的冷藏箱内保存。 【知识拓展】 1．消毒与灭菌的区别 消毒是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。例如一些常用的对皮肤、水果、饮用水进行药剂消毒的方法；对啤酒、牛奶、果汁和酱油等进行消毒处理的巴氏消毒法，等等。 灭菌是采用强烈的