野葛活性内生细菌的筛选和研究.pdfVIP

摘要 摘要 研究已经证实氧化特别是氧自由基与高等动物许多疾病的发生、发展密切相 关。天然抗氧化剂在医药卫生、食品、化妆品以及饲料等领域有巨大的应用的景。 原子团之间的糖苷键生成葡萄糖的酶。D．葡萄糖苷酶在食品、医药等领域应刚广 泛。本论文以抗氧化和胞外葡萄糖苷酶活性作为活性筛选指标，开展重要药用植 果如下： 1．野葛内生细菌抗氧化活性菌株筛选及研究。采用DPPH(1，1一二苯基苦 基 苯 肼 radical 1，1．Diphenyl一2-picrylhydrazyl acidldiammonium salt)自由基清除法对37株野葛内生细菌进行初筛，23株菌株 表现出DPPH和ABTS的清除能力。采用超氧自由基体系、羟基自由基体系以 及油酸氧化体系等实验方法对野葛内生菌的抗氧化活性进行复筛，结果表明，ll 株菌株表现出较高的自由基清除活性和抑制脂质过氧化活性，野葛内生细菌菌株 N92表现了良好的羟自由基、超氧阴离子自由基清除活性和抑制脂质过氧化活 性。通过大孔树脂吸附、葡聚糖凝胶柱层析等活性成分分离技术对菌株N92的 活性组分进行分离纯化。得到内生菌多糖D1和另一活性组分ADl，并对ADl 进行了紫外光谱、高效液相色谱及气质联用(GC．MS)进行检测。GC．MS检测 结果表明菌株N92抗氧化活性组分之一ADl为生物碱类物质，其主要成分为3． 甲基．哌嗪．2，5．二酮、六氢化．吡咯环【1，2一a]LL嗪一l，4．二酮和l，4．二苯基哌嗪。最 后对抗氧化活性组分ADl和D1进行了体外、体内抗氧化活性的定量研究。ADl 和Dl均表现较强的自由基清除活性；同时，ADl和D1也能抑制脂质过氧化活 性和小鼠肝匀浆中丙二醛MDA生成。体内小鼠实验表明，与D．半乳糖诱导的 衰老对照组相比，ADl样品组(100mg瓜g)能显著提高小鼠血清中超氧化物歧化 抑制小鼠组织中MDA的生成(降低40．830％)，能够增加衰老模型小鼠的心指 数、脾指数、肾指数和脑指数。 2．野葛内生细菌p．葡萄糖苷酶产生菌株筛选及研究。利用DNS法筛选到4 境因素(碳源、氮源、装液量、初始pH值和温度)对上述菌株产D一葡萄糖苷酶 摘要 的影响。在实验的条件下，菌株Pa2s产酶的最适碳源为葡萄糖，最适氮源为磷 株Pa2h最适碳源为葡萄糖，最适氮源为磷酸二氢钾，最适初始pH值为8，装液 量1 ℃；菌株NJl最适碳源为蔗糖，最适氮源为磷酸二氢钟，最适初始pH值为8， 装液量100ml／250ml，最佳发酵温度29℃。最后通过酶学性质研究，四株野葛内 生菌株所产的D．葡萄糖苷酶均适于酸性环境，最适pH约为4．5；其最适温度在 40℃．50℃之间。 3．活性菌株的初步鉴定。对12株具有较强抗氧化活性和B．葡萄糖苷酶的活 rDNA 性内生菌株进行了16s PCR扩增和序列分析的分子生物学初步鉴定。通过 strain 件绘制系统发育树。菌株N92与短小芽孢杆菌菌株3．2(Bacilluspumilus subtilisstrain 孢杆菌菌株A2(BacillusA2)有最高相似性(同源性99％，登录 号：EU567068．1)。 关键字：三裂叶野葛，内生细菌，3-葡萄糖苷酶，抗氧化 ABSTRACT ABSTRACT Studieshaveconfirmedthatoxidation freeradicaloxidation especiallyoxygen iS relatedtothe incidenceand of diseasesofanimals． closely high dev