强脉冲电场致细胞膜电穿孔的研究3.pdfVIP

第 22 卷第 4 期 中 国科 学 院 研 究 生 院 学 报 Vol . 22 No . 4 2005 年 7 月 Journal of the Graduate School of the Chinese Academy of Sciences July 　2005 ( ) 文章编号 2005 强脉冲电场致细胞膜电穿孔的实验研究 1 ,2 1 1 肖华娟 　严 　萍 　牟 　群 ( 1 中国科学院电工研究所 , 北京 100080 ; 2 中国科学院研究生院 , 北京 100049) (2004 年 3 月 18 日收稿 ; 2004 年 9 月 15 日收修改稿) Xiao HJ , Yan P , Mu Q. The experimental study of electroporation of cell membrane induced by pulsed electric field of high intensity . J ournal of the Graduate School of the Chinese Academy of Sciences , 2005 , 22 (4) :462～466 摘 　要 　采用肝癌细胞 HePG2 作为靶细胞 ,罗丹明偶联葡聚糖为荧光探针 , 荧光分光光度计 作为检测设备 ,试验研究细胞膜电穿孔与电脉冲参数之间的关系. 试验中发现随着电场强度或 脉冲宽度的增加 ,样品荧光强度增加 ,细胞膜穿孔率相应增强 ; 同时发现细胞膜电穿孔效应具 有累积效应. 关键词 　细胞膜电穿孔 ,强脉冲电场 ,生物效应 中图分类号 　Q27 1 　引言 细胞膜电穿孔是指在电脉冲的作用下 ,在细胞膜脂双层上形成的瞬时微孔 ,从而细胞膜的通透性和 膜电导瞬时增大 ,使那些在正常的情况下不易通过细胞膜的亲水分子 、病毒颗粒 、DNA 、蛋白质以及染料 [ 1] 颗粒等能通过细胞膜而进出细胞的生物物理过程 . 细胞电穿孔可用于各类生物细胞 ,具有效率高 ,无 [2 ] 残余毒性 ,参数易于控制 等优点. 目前 ,这一技术已广泛应用于多个领域 ,如生物技术 、医疗领域及遗 传工程等. 尽管电穿孔技术有着广泛的应用 ,但电穿孔的机理仍然是相当模糊的. 本文采用肝癌细胞 HePG2 细胞系作为靶细胞 ,试验研究 HePG2 细胞膜电穿孔与电脉冲参数之间的 关系. 并在此基础上探讨了细胞膜电穿孔的机理. 2 　实验方法 21 　实验系统和材料 实验由美国细胞波公司 PA2000 型电穿孔仪 ,产生脉冲幅值 、宽度及重复频率均可大范围调节的矩 形电脉冲. 间隔为 1mm 的标准电击杯. 荧光分光光度计 ,其检测参数最终确定为 :Ex WL = 540nm ,Em WL = 573nm ,Ex slit = 100nm ,Em slit = 50nm. 处于对数生长期 HePG2 细胞由实验室培养 ,试验中使用的穿 ( ) 孔介质为 HeBs 缓冲液 ,荧光探针为罗丹明偶联葡聚糖 Rhodamine B isothiocyanateDextran . 22 　实验方法 细胞膜是一具有流动性的薄层 , 由于细胞膜电穿孔直径很小 ,穿孔本身又是一个非常快速的动态过 程. 因此 , 电穿孔的观测较困难 ,细胞电穿孔的观察是试验成败的关键. 电穿孔的观察方法有很多种 ,如 用扫描电镜观察细胞膜电穿孔 ,但由