细菌的简单染色ppt课件.ppt

细菌的简单染色 目的要求 学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。 初步认识细菌的形态特征。 学习显微镜（油镜）的使用方法，熟悉无菌操作技术。 细菌染色意义 由于细菌个体微小，基本上无色透明，故将其用适当染料染色观察，方能显示它的形态、大小、构造及染色特性等，在细菌鉴别上有重要意义。 革兰染色是细菌学中使用最广泛的一种染色方法，籍此染色法，可将所有细菌区分为两大类。 简单染色 利用单一染料对菌体进行染色。 染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征，后者使染料能形成盐。 常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊红及刚果红属于酸性染料。 细菌染色方法及原理 1.在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷；碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，易与细胞结合使其着色。 2.细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸），所带正电荷增加，可采用酸性染料染色。 革兰染色原理 细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。 材 料 菌种 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 染色剂 仪器或其他用具： 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 香柏油 二甲苯 擦镜纸 生理盐水等。 涂片 干燥 固定 染色 水洗 镜检 简单染色方法 干燥 1、涂片 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水； 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 2、干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。 3、固定 手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。 原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。 4、染色 将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 染色时间： 吕氏碱性美蓝染色1~2min； 石炭酸复红染色约1min 草酸铵结晶紫染色约1min。 5、水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中； 手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。 6、干燥 自然干燥：平放于室温，自然干燥； 吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干； 吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。 7、镜检 涂片干后镜检。 防止水的折射，以便于观察。