糖的基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)研究.pdfVIP

V01．19 高等学校化学学报 NO．7 CHINESEUNIVERSITIES1090～1094 1 998年7月 CHEMICAI。joURNAI，OF 糖的基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)研究。 郝春雁 马秀俐+ 刘志强 季怡萍 刘淑莹 刘长城’ 孙允秀+ 刘举正+ (中国科学院长春应用化学研究所，长春，130022；吉林大学化学系+，长春，130023) 摘要 通过糖类化合物3种常用基质MALDI—MS分析效果的比较以及寡糖和多糖正、负离子 MALDI—MS谱的对比，找到了适合糖分析的基质2，5-DHB，探讨了糖类化合物激光解吸／电离条 件下形成离子的过程，指出了Na+、K+离子在寡糖分子量测定中的重要作用，借助柱层析分离手 段，成功地测出了分子量大于10000的葡聚糖的分子量． 关键词基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)，寡糖，多糖，分J：量 分类号0629．1 近年来，人们对糖类化合物的生理功能有了新的认识，糖类化合物继蛋白质、核酸之后， 成为生命科学领域中的又一研究热点．糖的性质与其分子量大小密切相关，因此糖分子量特 别是多糖分子量分布的测定，在糖类化合物的研究和应用中，有着重要的意义．传统的多糖 分子量测定方法，如渗透压法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法等，不仅耗样多、误差大或受 分子形状的影响，且各方法所测分子量的性质不同，需要几种方法配合使用[】]，很不方便． 而糖本身高极性、难挥发、热不稳定的性质以及多糖较高的分子量和其分子量的发散，使糖 DI—MS就以其灵敏快捷、直观准确、极高的质量上限、良好的“软电离”性质、对杂质的包容 性以及可直接分析混合物而无需预先分离的特点，广泛应用于生物化学领域[4]，尤其对蛋白 质、核酸的分析研究，已取得了突破性的进展．MALDI—MS在糖研究中的应用，也显示出一 定的潜力和应用前景[5’6]．本文选用三种最常见基质，对寡糖、寡糖混合物和多糖进行了详细 的MALDI—MS研究，初步探讨了寡糖、多糖激光解吸／电离条件下的离子化过程，说明了 析后葡聚糖的分子量(MW一105～106)． 1 实验部分 1．1试 剂 Pharmacia公司(Uppsala，Sweden)．基质由美国原Linear mmol／L mmol／L mmol／L芥子酸(sA)，30 提供：100 2，5一二羟基苯甲酸(2，5-DHB)，100 口一CN一4羟基肉桂酸(ACHC)． 1．2仪器与原理 LDI一1700型激光解吸／电离飞行时间质谱仪，原Linear 收稿日期：1997—06—24．联系人：刘淑莹．第一作者：郝春雁，女，27岁，博士研究生 *国家中医药管理局资助课题． 万方数据万方数据 郝春雁等：糖的基质辅助激光解吸／电离质谱(MALDI—MS)研究 nm) 电离飞行时间质谱是激光解吸／电离技术与飞行时间质谱仪的结合．即用某一波长(337 的脉冲激光束辐照结晶于样品靶上的被分析物，使其解吸／电离，并根据离子在无场区飞行 一定距离所用时间正比于其质荷比的平方根，用能够瞬时记录谱图的飞行时问质谱仪进行质 量分析． 1．3实验方法 cm×1 的待测溶液；将2mg上述葡聚糖标样用85 crfl的琼脂糖凝胶柱分离，蒸馏水洗脱，速 度0．1mL／min，一次收集2．5mL，作待测液．将基质与待测液按等体积比混合均匀．取0．5 弘L基质或基质与待测液的混合液，滴于样品探头靶心，真空干燥使其快速结晶，送入离子 源，337nm氮分子激光聚焦辐照于探头表面，使样品解吸／电离，分别进行正、负离子质谱分 Pa，用外标