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VoI. 28 高 等 学 校 化 学 学报 No. 2 2 0 0 7 年2 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 238 ~ 24 1 小型微波谐振腔用于蛋白质微波辅助酶解 窦文超，郇延富，张志权，张华容，王 超，李 明，冯国栋，金钦汉 （吉林省光谱分析仪器工程技术研究中心，吉林大学化学学院，长春 130023 ） 摘要 采用微波谐振腔对细胞色素c 以及牛血清白蛋白进行微波辅助酶解，通过电喷雾三级四极杆质谱对 得到的肽段进行分析，证明该方法可用很低的微波功率将蛋白质彻底酶解为多肽. 通过调整微波条件可以 使蛋白质的酶解效率基本达到100% ，细胞色素c 和牛血清白蛋白的序列覆盖率分别为45% 和26% . 该方法 不但可将蛋白酶解时间由传统方法的16 1 缩短为20 min ，还将功率由使用微波炉时的数百瓦降至20 W. 关键词 微波谐振腔；微波辅助酶解；质谱；选择性酶切 中图分类号 O652. 7 文献标识码 A 文章编号 0251-0790 （2007 ）02-0238-04 肽质量指纹图谱法（Peptide mass fingerprint ，PMF ）是研究蛋白质结构信息和鉴定蛋白质的最常用 的快速方法. 使用肽质量指纹图谱法分析蛋白质的结构需要将蛋白分解成肽段，然后用LC-ESI-MS 或 ［1，2 ］ MALDI-MS 分析多肽混合物 . 传统的蛋白酶解方法往往需要过夜，这大大限制了蛋白质分析的速 ［3 ~ 6 ］ 度. 微波辅助化学反应方法以其快速和节能的特点已经在化学领域中得到广泛的应用 . 最近已见 到使用微波辅助加速蛋白质的酶解方法的报道［7 ~ 11］，利用该法酶解蛋白质一般只需十几分钟. 报道的 微波方法采用微波炉，其功率一般都在数百瓦到几千瓦，而一般蛋白质分析的样品量都只有几百微 升，所以在进行微波分解蛋白质时，通常在微波炉中放一盆水来吸收多余的微波. 鉴于传统方法和上 面微波方法的不足，本组提出一种新的微波辅助酶解方法，即使用3/ 4 波长微波谐振腔［12 ，13 ］对蛋白质 进行微波辅助酶解，这样既保持了微波方法快速高效的特点，又避免了使用微波炉能源浪费的问题. 实验中用细胞色素c（CC ）和牛血清白蛋白（BSA ）作为标准蛋白考察了本方法对蛋白质的酶解效果. 1 实验部分 1. 1 试剂与仪器 牛血清白蛋白（BSA ）和细胞色素c 均购自北京鼎国生物技术有限公司；胰蛋白酶购自FIuka 公司； 实验用水为二次蒸馏水. WGY-20 微波功率源（吉大 ·小天鹅仪器有限公司）；3/ 4 波长谐振腔（实验室自制）；O-Trap 三级 四极杆质谱（AppIied Biosystems Sciex ，Foster City ，USA ）；荧光光谱仪（RF-530 1PC ，岛津）. 本实验的最 佳蛋白酶解条件如表1 所示. Table 1 The prime parameters of this experiment Microwave power/ W 20 Digestion time/ min 20 （BSA ） SampIe voIume/ mL 1. 0 10 （CC ） 质谱条件：气帘气和雾化气均为N