炎症因子在尿毒症大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.docVIP

炎症因子在尿毒症大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用 作者：陈志 冯野 勾筱娟 孙珉丹 【摘要】 目的 观察尿毒症大鼠脑缺血再灌注(I/R)后炎症因子的动态变化。方法 清洁级健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为单纯尿毒症组(CRF组)6只、尿毒症合并脑I/R组(CRF+I/R组)24只，制备尿毒症模型，成模后，再取同样大鼠30只，随机分为正常对照组6只、单纯脑I/R组24只。将I/R组和CRF+I/R组大鼠再制作大脑中动脉栓塞模型，脑缺血2 h后再灌注，按再灌注后不同时间点(0、2、12、24 h)I/R组、CRF+I/R组又分为4个亚组，每个亚组6只。I/R组和CRF+I/R组按再灌注后的时间点取材，正常对照组在饲养3～7 d后取材，CRF组在成模后0～3 d取材，RTPCR法检测脑组织中TNFα、IL1β、IL6 mRNA表达情况。结果 TNFα mRNA：正常对照组与CRF组大鼠脑组织TNFα mRNA的表达差异不显著(Pgt;0.05)，CRF组大鼠TNFα mRNA的表达较I/R组各时间点均降低(Plt;0.05);脑I/R两组大鼠TNFα mRNA在2 h时间点表达最强，此后逐渐下降;CRF+I/R组大鼠各时间点TNFα mRNA的表达均较CRF组、I/R组升高(Plt;0.05)。IL1β mRNA、IL6 mRNA：CRF组大鼠IL1β mRNA、IL6 mRNA的表达均较正常对照组升高，但差异不显著(Pgt;0.05);与I/R组各时间点相比，CRF组大鼠IL1β mRNA、IL6 mRNA的表达均明显偏低(Plt;0.05);脑I/R两组大鼠脑组织中IL1β、IL6 mRNA表达随再灌注时间延长逐渐升高，至24 h达高峰;与I/R组和CRF组相比，CRF+I/R组各时间点IL1β mRNA和IL6 mRNA表达均显著升高(Plt;0.05)。结论 炎症因子参与了尿毒症大鼠的脑I/R损伤，提示尿毒症的微炎症状态对神经系统具有一定的影响。 【关键词】 尿毒症;脑缺血再灌注;炎症因子 　　 近年来，随着肥胖、高血压、糖尿病及高龄人群的不断增多，慢性肾脏病(CKD)和脑血管病的发病率呈逐年增高趋势，已成为人类面临的严重公共卫生问题〔1〕。尿毒症是各种原发或继发的慢性肾脏疾病不断恶化、进展的最终阶段，此时肾脏功能严重受损，大量代谢产物在体内蓄积，加之钠水潴留，造成病人体内酸碱平衡紊乱及全身各系统功能失调，其中心脑血管系统受累最重，是影响尿毒症患者预后的主要因素;在中枢神经系统，尿毒症病人脑血管病的发病率较高，其死亡率即使在透析病人中也占很大比率。然而，有关尿毒症病人发生脑缺血再灌注(I/R)损伤后的病理生理变化及其机制尚未见报道。本文以尿毒症大鼠为研究对象，动态观察其发生脑I/R后脑组织中炎症因子的变化，从而明确尿毒症体内长期存在的微炎症状态对中枢神经系统的影响，为临床治疗尿毒症合并缺血性脑血管病提供新的理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 清洁级健康雄性Wistar大鼠30只，体重250～280 g，实验室条件适应性喂养1 w，术前自由进食饮水，随机分为单纯尿毒症组(CRF组)6只、尿毒症合并脑I/R组(CRF+I/R组)24只，制备尿毒症模型，成模后，再取同样大鼠30只，随机分为正常对照组6只、单纯脑I/R组48只。所有4组大鼠中，除正常对照组和CRF组外，其余两组大鼠再制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型。脑缺血2 h后再灌注，按再灌注后不同时间点(0、2、12、24 h)I/R组、CRF+I/R组又分为4个亚组，每个亚组6只。首先参照文献方法〔2〕，制备5/6肾切除尿毒症大鼠模型：10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)大鼠腹腔注射，麻醉后俯卧位固定鼠台上，于脊柱两侧肾脏部位剪毛，碘伏常规消毒皮肤，戴无菌手套，铺无菌洞巾。行左背部斜切口，剪开皮肤及肌肉，暴露左侧肾脏，剥离肾包膜，结扎(7号线)左肾上、下极，尽量结扎皮质约2/3的肾组织，切除结扎部分，立即以吸收性明胶海绵压迫止血，无明显出血后复位肾脏，缝合各层组织，术后切口碘伏消毒。术后腹腔注射青霉素7.2万U/100 g，连用3 d。1 w后进行第2次手术，在脊柱右侧斜切口，剥离肌层，结扎肾门部位，切除右侧肾脏。缝合各层组织，术后切口碘伏消毒。腹腔注射青霉素3 d(剂量同前)。此模型制备成功后，再参照文献〔3〕，制备大鼠大脑MCAO模型：用10%水合氯醛将大鼠腹腔注射麻醉后，仰卧位固定在实验台上，沿颈部中线切开皮肤，钝性分离皮下组织。解剖显微镜下分离左侧颈总动脉(CCA)，置线备用。向上分离左颈外动脉(ECA)及颈内动脉(ICA)，电凝ECA两分支甲状腺上动脉及枕动脉，在距CCA分叉处约5