DB12_T647-2016大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法.pdf.pdfVIP

ICS 67.050 B 31 DB12 天 津 市 地 方 标 准 DB 12/T 647—2016 大白菜品种纯度SSR 分子标记检测方法 Methods of identifying varietal purity of Chinese cabbage by using SSR-based markers 2016-09-27 发布 2016-11-01 实施 天津市市场和质量监督管理委员会发布 DB 12/T 647—2016 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由天津市农村工作委员会提出。 本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、天津市蔬菜研究中心。 本标准主要起草人：赵新、王超楠、兰青阔、王成、刘莉莉、朱珠、李梅、陈锐、徐石勇。 本标准2016 年9 月首次发布。 I DB 12/T 647—2016 大白菜品种纯度SSR 分子标记检测方法 1 范围 本标准规定了大白菜品种纯度SSR分子标记检测方法的术语和定义、检测方法、纯度计算方法。 本标准适用于大白菜单交种的纯度检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 品种纯度 varieties purity 品种纯度指种子在SSR分子标记带型方面典型一致的程度，用具有本品种特异带型的种子粒数占 检测样品种子粒数的百分率表示，以反映某品种特征特性的一致性程度。 3.2 聚合酶链式反应 polymerase chain reaction （PCR ） 一种在体外通过酶促反应扩增特异DNA片段的技术。 3.3 简单重复序列 simple sequence repeat （SSR ） 由几个核苷酸（1-6个）为重复单位聚集而成的长达几十个至几百个bp （一般为100-200bp ）的串 联重复序列，又称微卫星序列或短串联重复序列，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。 3.4 分子标记 molecular marker 以蛋白质、核酸分子的多态性为基础，检测生物在遗传上的差异。 4 原理 SSR分布于大白菜整个基因组，每个位点上重复单位的数目不同造成了品种间的多态性，利用PCR 技术将多态的SSR扩增出来，通过电泳检测扩增产物，利用电泳图谱进行大白菜品种纯度检测。 1 DB 12/T 647—2016 5 仪器设备及试剂 5.1 仪器设备 PCR仪；测序电泳槽；水平电泳槽；高压电泳仪（3000 V ，400 mA ，400 W ）；万分之一电子天 平；微量加样器；磁力搅拌器；台式离心机；紫外-可见成像系统；胶片观察灯；水平摇床；高压灭菌 锅；pH计等。 5.2 试剂 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na ）；三羟甲基氨基甲烷（Tri