药分第十三章.pptVIP

3）HPGFC 应用：蛋白质、多肽的分离及分子量测定。 示例：重组人肿瘤坏死因子衍生物的分子量 的测定 柱：Beckman Ultraspherogel SEC 3000 流动相：0.1mmol/LKH2PO4:0.1mmol/LNa2SO4 （1:1）0.05%叠氮化钠 标准蛋白分子量曲线的制备： 醛缩酶 血清白蛋白 右旋糖苷蓝 碳酸酐酶 抑蛋白酶肽 酪氨酸 T0 完全排阻 完全进入填料空隙 Tt 标准蛋白分子量曲线：Kd -- lg M.W. 样品测定： 应用示例：ChP（2000）重组人胰岛素的质量控制 1）鉴别： 法1：在效价测定项下，供试品主峰的保留时间 应与对照品的一致。  法2：供试品与对照品分别经过酶解后，再分别 进行梯 度洗脱，供试品的肽图谱与对照品 的肽图谱一致。 2）检查： 检查项目：有关物质、高分子蛋白、锌、氮、 干燥失重、无菌、细菌内毒素。 有关物质：供试液经梯度洗脱，按峰面积归一化 法计算有关物质的量不得超过3.0%。 高分子蛋白质：  固定相：色谱用亲水硅胶，它可以分离分子量 为5000～6000的球状蛋白。流动相：0.4mol/L 碳酸氢铵-乙腈（69 : 31）测定：分别测定供试液（1mg/ml）和对照液（将供试液稀释成0.01mg/ml），供试液显示的所有分子量大于重组人胰岛素单体的各峰面积之和，应不大于对照液主峰面积（限量1.0%)。 3）效价测定：固定相：ODS C18 流动相：硫酸盐缓冲液-乙腈（74︰26） 系统适用性试验：测定胰岛素主峰和A21脱氨胰 岛素峰之间的分离度与拖尾因子。含量测定：分别进样供试液和对照液，按峰面积 外标法计算含量。 3.灌注色谱法 固定相：聚苯乙烯二乙烯高度交联结构上构 成贯穿孔 颗粒分离介质----POROSR。 双模式孔结构：80～150nm大扩散孔 600～800nm贯穿孔 允许液体传送流经过分离介质内表面，使样品由流动相直接灌注入介质颗粒中，扩散作用不再是主要的。 介质颗粒内部可利用反应的表面积增加，容量和分辨率也随之增加，可使生物活性大分子快速分离纯化。 2．酶活力测定法 1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越高。  酶反应速度可以用单位时间反应底物的减少或产物的增加来表示。 通常酶活力测定时，先制备酶反应进程曲线和酶浓度曲线。通过酶反应速度的测定，求得酶的浓度或含量。 酶反应进程曲线 纵坐标为底物或产物的变化量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。酶浓度曲线 纵坐标为反应速度，横坐标为酶量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适宜。   第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概念 基本要求 概述 质量检验的基本程序与方法 常用定量分析方法及其应用 练习与思考 返回主目录 基本要求 1．掌握本类药物质量检验的基本程序与方法类型。 2．掌握HPLC法和酶活力测定法在本类药物测定中的应用。 3．熟悉本类药物的范围、种类、质量控制的要点。 4．了解本类药物含量测定的其他方法。 返 回 一、防病、治 病的三大药源 第一节 概 述 1．生化药物： 例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。 2. 基因工程药物： 以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。 DNA重组技术（基因工程）：生产过程为 天然基因 合成的核苷酸序列 内切酶 连接酶 载体 重组的遗传物质 转移到 宿主细胞 增殖、表达 分离纯化 目的产物 三、特点 1. 生物体的基本生化成分  2. 分子量大: 分子量测定  3. 结构难确证