遗传学第五章 基因组.ppt

（2）叠连群建立 （3）序列测定 ①DNA测定的酶法， ②化学测序法 ③ DNA自动测序 DNA测定的酶法： 即Sanger法、终止法、双脱氧法 DNA聚合酶， 单链DNA模板，引物复性后分4份 加4种dNTP（dATP、dGTP、dTTP和 dCTP） ，其中一种为α-32P标记 各加一种双脱氧核苷三磷酸（ddNTP）,3’ 缺少一个羟基，故不能同后续的dNTP形成 磷酸二酯键。 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 分离制得的放射性自显影区带图谱 直接读得DNA的碱基序列 序列测定方法之一 AGTTGCTA 化学测序法又称Maxam-Gilbert法 序列测定方法之二 把待测序的DNA分子成单链分子，其5’端用32P进行放射性标记。 分成4份，每份用一种化学试剂处理DNA片段，每种试剂可使DNA分子在一种碱基的5’端的磷酸二酯键处发生断裂。使每个DNA分子只发生一次断裂。 把这4种反应产物用聚丙烯凝胶电泳进行分离， 用X光胶片进行曝光，得到一张由不同条带组成的序列图。 从图上就可以读出待测DNA片段的碱基序列。 序列测定方法之三 DNA自动测序仪： 根据Sanger法酶促原理 4种荧光染料标记引物 激光照射 阅读4种颜色 GACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAA 1.部分酶切 3.叠连群建立 2.DNA测序 CTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCACTGGACCAGCACTGGACCAGCACTGGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGACTGGACCAGCAGTTAGAAAGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGTCGTCAGTCTTTAGTTGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCAACTGGACCAGCAGTTAGAAATCA 克隆:是英文Clone一词的单译，意为无性繁殖系，即通过