循环游离DNA检测及其临床应用进展.pdfVIP

·564· 临床检验杂志2017年8月第35卷第8期ChinJClinLab Sci，August2017，V01．35，No．8 DOI：10．13602／j．cnki．jcls．2017．08．02 ·述评· 循环游离DNA检测及其临床应用进展术 丁春明，杨政权，栾菊，金胜男(温州医科大学检验医学院、生命科学学院，检验医学教育部重点实验室，浙江 温州325035) cell—free 摘要：循环游离DNA(circulating 特定情况下(如肿瘤患者、孕妇、接受器官移植的患者等)，一小部分来自“异源性”细胞的cfDNA(如肿瘤细胞、胎儿细胞、或供 体细胞)可以作为基因检测的标志物。基于cfDNA检测的“液态活检”技术在产前诊断、肿瘤的筛查、早期诊断、治疗监测和预 后评估等多个方面受到极大的关注。该文就cfDNA的产生与特征、检测方法、检测指标、临床应用等作一总结及论述。 关键词：循环游离DNA；循环肿瘤DNA；肿瘤；临床应用；液态活检 中图分类号：R446；R73 文献标志码：A cell—flee DNA， 循环游离DNA(circulating cfDNA)是指存在于人体血液循环中的、游离于细胞的半衰期从16rain到2．5h不等，通常经核酸酶作 外的微量内源性及异源性DNA片段，包括游离基因 用和肾脏清除HJ。高通量测序结果显示cmNA的 组DNA和游离线粒体DNA等。1948年，Mandel和长度分布主要集中在165bp左右∞J，相当于缠绕在 M6tais首次报道外周血中存在cfDNA，但直到1994核小体上的DNA与组蛋白H1接头长度之和。来 年从肿瘤患者外周血中检出RAS基因片段，cfDNA 的重要意义才逐渐被人们所重视。随着精准医疗计 划和个体化医疗时代的到来，越来越多的研究者和 长度短。血浆中的cfDNA片段平均长度与尿液中 cfDNA长度不同，尿液cfDNA相对更短。 临床医生将基于cfDNA检测的“液态活检”应用于 产前诊断、肿瘤疾病的筛查、早期诊断、治疗监测和 据文献报道，健康人血浆cfDNA浓度约为1～ 预后评估等多个方面，视其为补充或替代组织活检 10ng／mL∞J，而肿瘤患者的cfDNA水平相对增加。 的新方法。因此，本文就cfDNA检测的技术方法、ctDNA能够在多种肿瘤患者外周血中检出，其浓度 指标及临床应用进展作一论述。 与肿瘤大小、分期等相关。ctDNA的浓度在不同患 者间的差异也可能很大。在癌症早期患者中， 1 cfDNA的产生与特征 1．1 cfDNA的产生cfDNA释放的具体机制尚不 低，检测难度很大。 明确。一般认为cfDNA起源于细胞的坏死、凋 2 cfDNA的检测方法 亡…。坏死的细胞被巨噬细胞等吞噬，释放经过消 化的DNA到血液中形成cfDNA。在实体瘤中，由于cfDNA检测的方法可以根据主要技术原理的不 肿瘤组织的快速生长，因养分供应不足等原因发生 real．time 同分为基于实时荧光定量PCR(quantitative 细胞死亡，直接释放DNA片段到外周血中。据 chain polymerase ital Diehl等旧1估计，一个肿瘤重量约100g的患者体内 PCR，dPCR)技术、高通量测序(又称二代测序，