模拟微重力对小鼠成纤维细胞miRNA表达的影响.pdfVIP

·756· ·基础研究· 模拟微重力对小鼠成纤维细胞 miRNA表达的影响 宋向卫 王占宇 姜玉峰徐冰心 司少艳周金莲 杨鹤呜李成林崔彦 【摘要】 目的 探讨微重力环境对小鼠成纤维细胞应激损伤相关miRNA表达的影响。 方法体外培养I_929细胞，应用简单随机方法分为模拟微重力(SMG)组(SMG组)和正常重力(NG)对 照组(NG组)。细胞培养7d，提取样本总RNA行荧光标记和芯片杂交，采用FeatureExtraction软件 处理杂交图像提取原始数据，应用Genespring软件进行分位数标准化和后续处理，筛选差异表达显 著的miRNA，qRT—PCR验证芯片结果准确性。通过miRNA靶基因预测数据库TargetScan和 microRNAorg对差异miRNA进行靶基因预测，其交集作为潜在调节靶基因，对预测靶基因分别进 行基因本体和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析，判定差异miRNA主控的生物学过程 和(或)信号通路。结合mRNA差异表达谱行miRNA—mRNA联合分析，并构建miRNA—mRNA功 能网络和miRNA—mRNA调控网络。结果rIliRNA芯片检测发现，L929细胞在模拟微重力环境 下较正常重力环境下差异表达的IIliRNA有21个，4个显著上调，包括inlnil—miR一669j、一122—5p、 0．05)。qRT—PCR结果与miRNA芯片结果一致(P0．05)。靶基因预测和功能富集分析提示多 种创伤修复相关生物学过程和信号通路显著富集(P0．05)。通过miRNA—mRNA联合分析构建 的miRNA—mRNA功能网络和miRNA—mRNA调控网络涵盖了所有具有显著差异的miRNA。 结论微重力环境下小鼠成纤维细胞多种应激损伤相关miRNA表达发生显著变化，可能在微重 力环境下创伤修复过程中发挥重要作用。基于芯片技术的miRNA靶基因预测和功能富集分析可 为失重应激损伤机制探讨和创伤修复措施提供理论依据。 【关键词】 失重模拟；成纤维细胞；应激损伤 基金项目：全军医学科研“十二五”重点项目(BWSllJ051)；全军试验技术研究计划重点项目 (SYFDl500128) fibroblasts Effectsofsimulated onmiRNA inmouse microgravityexpression SongXiangwei+． WangZhanyu，Jiang Bingxin，SiShaoyan，ZhouJinlian，YangHeming，LiChenglin，Cui Yufeng，Xu Yan． General +Departmentof Surgery，306HospitalofPLA．TeachingHospitalofPekingUniversity， 100101，China Beijing authors：Cui Corresponding Yah，Tel：0086—1391—1076—905，Email：dryancui@aliyun．con；XuBingxin， Tel：0086—1500—1083—787，Email：xubingxin75@163．com To theeffectsofsimulated cellculture rotary 【Abstract】Objectiveinvestigate microgravityby L929 r ofmiRNAinmousefibroblastsL929cellline． Methods systemRCCS)onexpressionprofiles normal cellswereculturedinvitroanddividedintosimul