科研计划书15dPGJ2抑制单核噬细胞株的生物活性及作用机制的探讨.docVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　张媛媛 122011000038 科研计划书 项目名称: 15d-PGJ2抑制单核/巨噬细胞株的生物活性及作用机制的探讨 研究类型：联合攻关（）重点支持（√） 申请单位：基础医学院 单位归属：首都医科大学 通讯地址：北京市丰台区邮政编码单位电话：010- 基本信息： 项目信息 中文题目 15d-PGJ2抑制单核/巨噬细胞株的生物活性及作用机制的探讨 英文题目 学科1 细胞生物学 学科2 分子生物学 申请经费 XX万元 起止年月 2012．1 — 2014．12 申请者信息 姓名 张媛媛 性别 女 出生年月 民族 汉 学位 硕士在读 职称 职 务 身份证号 主要研究领域 肝纤维化研究 电话 手机号码 电子邮箱 合作单位信息 单 位 名 称 代 码 首都医科大学基础医学院 项目摘要（限400字）： 肝纤维化是多种病因所致的慢性肝病共有的病理过程，其主要病理特征是以胶原为主的细胞外基质（extracellular matrix, ECM）在肝脏内的过量沉积。肝脏肌成纤维细胞（hepatic myofibroblasts, hMF）是合成和分泌 ECM 的主要细胞，在肝纤维化发生过程中起着决定性的作用。最近，骨髓来源的肌成纤维细胞颇受关注，然而对于它们在体内的迁移机制却知之甚少。鞘磷脂的代谢中间产物——磷酸鞘胺醇（sphingosine 1-phosphate, S1P）作为细胞迁移的重要调节器，发挥着重要的生物学功能。本研究结合体内和体外实验，旨在证实在肝纤维化发生过程中骨髓间充质干细胞可向肝脏迁移分化为 hMF，并以 S1P 为靶分子，探讨其介导骨髓间充质干细胞向受损肝脏归巢的作用。ICR 小鼠经射线照射后通过尾静脉移植带有绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）的全骨髓细胞或骨髓间充质干细胞，4周完成骨髓重建后分别以 CCl4 和 BDL 制成肝纤维化模型。在 1 天、3 天、2 周、4 周和 6周时处死小鼠，取肝组织应用免疫荧光染色的方法鉴定并统计骨髓来源的 hMF。同时，用高效液相色谱的方法测定纤维化肝组织和血清中 S1P 的含量，用 Western blot 和 real-time RT-PCR 的方法分别检测与 S1P 代谢相关酶的蛋白和 mRNA 水平，以及肝组织中 S1P 特异受体的表达变化。 体外实验：应用 Boyden Chamber 培养方法检测 S1P 对骨髓间充质干细胞迁移的作用。同时，采用 S1P 受体拮抗剂预处理细胞，鉴定参与 S1P 介导骨髓间充质干细胞迁移的受体类型。1． 骨髓间充质干细胞在肝纤维化模型小鼠体内可迁移至肝脏，并在受损的肝组织内分化为 hMF； 2． 纤维化肝组织和血清中 S1P 的含量显著增加，而骨髓中 S1P 的含量无明显变化。此外，纤维化肝组织中与 S1P 代谢相关的鞘胺醇激酶1（sphingosine kinase 1, SphK1）mRNA 表达上调，其活性也增强，S1P 磷酸水解酶（S1P phosphatase）以及裂解酶（S1P lyase mRNA）没有明显变化； 3． S1P 在体外明显刺激了骨髓间充质干细胞的迁移，呈剂量依赖性，受体 S1P3参与了这一过程； 4． 体内实验中，受体S1P3 的拮抗剂——Suramin 明显抑制了骨髓细胞向受损肝脏的归巢； 5． 转化生长因子?1（TGF-?1）在体外能诱导骨髓间充质干细胞向 hMF 分化。 结论：S1P/S1P3 信号介导了骨髓间充质干细胞向受损肝脏的归巢，参与了肝纤维化的发生过程，提示 S1P 可以作为肝纤维化的一个生物标记物，以 S1P/S1P3 信号为作用靶点将有望设计出新的抗纤维化药物。 二、项目组成员 性别 年龄 学位 研究方向 单位 XX 男 25 硕士在读 肝纤维化研究 首都医科大学 XXX 女 23 硕士在读 肝纤维化研究 首都医科大学 三、立题依据 肝纤维化是多种病因所致的慢性肝病共有的病理过程，涉及到细胞、细胞因子和细胞外基质（extracellular matrix, ECM）之间一系列复杂的变化，其主要特征是以胶原为主的细胞外基质在肝脏内的过量沉积。进一步发展可引起肝小叶结构改建、假小叶及结节形成，即肝硬化。慢性肝病的病因包括病毒性肝炎、慢性酒精中毒、慢性胆汁瘀积、化学毒物或药物、肝脏淤血、遗传和代谢疾病以及血吸虫的感染等，所有这些病因均可导致肝细胞炎症及损伤，使肝细胞呈弥漫变性、坏