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蛋白质测定 文件编号：JY-SHH-001 ■■■■■人民医院 总蛋白 实施时间：2005.05.21 检验科生化实验室 （TP ）SOP文件 文件版本：SOP ver 1.0 页码：共 5 页，第 1 页 1. 原理： 1.1 方法学：双缩脲终点比色法。 1.2 方法原理：蛋白质 （Protein）分子中的肽键 （－CONH－），在碱性 （Alkali ）溶液中能与二价铜 离子形成紫色络合物，其色泽的深浅与蛋白质浓度成正比。贝克曼 SYNCHRON CX9 PRO 生化仪 会自动的将适量的试剂及样本加入反应管(cuvette) 中。机器会自动侦测 560 nm 波长处吸光度的改 变，吸光度的改变直接与总蛋白质的浓度成正比。 1.3 反应方程式： Alkali Protein + Cu＋＋ ―――→ Protein-Copper Complex （紫色络合物） 2. 样本： 2.1 病人准备：病人应处于安静、呼吸稳定的状态，穿刺时应尽量减少病人的疼痛感。坐位与卧位、 睡眠后与清醒时、运动后与进餐后都会产生不同的结果。 2.2 样本种类：生物学的体液样本应该以同样的方式来收集，以便用来测试任何实验室中的试验。 新鲜的、刚被抽出的血清或血浆样本是最佳的选择。如果用血浆作样本，可以使用肝素、EDTA 作抗 凝剂。本法也可测定浆膜腔积液中的总蛋白，全血、尿液与脑脊髓液是不被推荐的样本。 2.3 样本采集：除非是卧床的病人，一般在静脉采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布， 因此影响测定水平。故在采血前至少应静坐 5min。一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过 1min，穿刺成功后立即松开止血带。采血前 24 小时禁食高脂。（详见本科制定的静脉采血SOP 文件） 2.4 样本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求 （要求封密、无溶血、无杂物）、所用试管是否 正确、试管标签是否填写完整、并询问采血时间，对不合格标本应退回重采，并填写记录。 2.5 样本保存： 2.5.1 采血管应该一直保持垂直、塞住的姿势。血清或血浆应该立即被分离，防止溶血，避免接触 到血球部分。从采血到上机的最长时间限制是 2 小时。 2.5.2 分离的血清或血浆在 15℃～30℃的环境下不应该保存超过 8 小时。假如测试无法在 8 小时内 完成时，血清或血浆应该被保存在 2℃～8℃的环境中；假如测试无法在 48 小时内完成，或分离的 样本无法储存超过 48 小时，样本应该冰冻在零下 15℃～20℃的环境中。冰冻的样本只能解冻一次， 有时分析物产生降低或恶化的情形多半是因为重复冰冻及解冻的原因所造成。 2.6 样本准备： 2.6.1 血清或血浆样本可直接使用。 2.6.2 浆膜腔积液样本如浑浊或有凝块出现，需离心后使用。 检验科 SOP 文件·生化实验室·项目测试 ―1― 蛋白质测定 文件编号：JY-SHH-001 ■■■■■人民医院 总蛋白 实施时间：2005.05.21 检验科生化实验室 （TP ）SOP文件 文件版本：SOP ver 1.0 页码：共 5 页，第 2 页 2.7 样本容量：0.5mL 的样本杯和原试管是最合适的选择。