薄层色谱的应用及常见问题-王伟影.pptVIP

薄层色谱的应用及常见问题 丽水市食品药品检验所 王伟影 2013.08 薄层色谱法的定义 薄层色谱法（TLC）系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的对照物按同法所得的色谱对比，并可用薄层扫描仪进行扫描，用于，鉴别、检查或含量测定。 薄层色谱法的发展和特点 薄层色谱法的发展：从经典的柱色谱及纸色谱基础上发展起来的一种色谱技术。 薄层色谱法的特点：具有设备简单、操作方便、分离快速、直观等特点。尤其对中药分析，既可对已知有效成分的品种定性、定量，又可对成分复杂的品种进行特征性成分分析或进而作指纹图谱分析。 薄层色谱法的特点：薄层色谱是一种 “敞开系统”的色谱技术，与柱色谱的区别之一是除材料及容器外，外界环境条件对被分离物质的层析行为影响很大，分离机制也很复杂；其次由于分析的全过程是横向的离线多步骤操作，所以操作技巧明显影响色谱质量，注意控制影响色谱质量的因素是非常重要的。 薄层色谱法的原理 利用混合物中各组份的物理化学性质的差别，在层析过程中，在不相溶的两个相中分布的不同，达到分离目的。这两个相，一个是涂布在薄层板上的吸附剂，叫固定相，另一个是在展开过程中流过固定相的展开剂（有机溶剂），叫流动相。 将待分离的样品溶液点在薄层板的一端，在密闭的容器中用适宜的溶剂（展开剂）展开，由于吸附剂对混合物中不同物质的吸附力大小不同，对极性大的物质吸附力强，对极性小的物质吸附力弱。因此当溶剂流过时，不同物质在吸附剂和溶剂之间发生连续不断地吸附、解吸附、再吸附、再解吸附。宜被吸附的物质（极性大、被附力作用强的物质）相对移动较慢，在薄层板上移动的距离就小；反之，较难被吸附的物质（极性小、被附力作用弱的物质）相对移动较快一些，在薄层板上移动的距离则大。经过一段时间的展开，混合物中各组份在薄层板上连续不断地进行吸附和解吸附过程，从而使各组份移动的速度产生差异，不同物质就被彼此被分开，最后形成互相分离的斑点。 薄层色谱法的优点 1. 展开时间短，一般十至几十分钟； 2. 分离能力强，斑点集中； 3. 灵敏度高，通常几至几十微克的物质即可被检出； 4.显色方便，可直接喷洒腐蚀性的显色剂，如浓硫酸等； 5.所用仪器简单，操作方便，可以普及； 6.薄层板价格低廉，一块板可同时检测多个样品； 7.色谱直观性强。 薄层色谱法的应用 以特征成分鉴别药材或处方中的药味 鉴别药材真伪 区别不同药用部位 毒性成分的检查 检查是否掺有伪品、色素等。 同时鉴别多个药材的多种成分 生物活性成分检测 比移值（Rf值） 在固定的条件下（吸附剂、温度、展开剂等），不同化合物如甲和乙在薄层上以不同的速度移动，当停止展开后，各组分的色斑在薄层上的位置可用尺来测量，以比移值（Rf值）表示。 最理想的Rf值为0.4～0.5，良好的分离,Rf值为0.15～0.75，如果Rf值小于0.15或大于0.75则分离不好。 一种物质在固定的条件下有固定的Rf值，不同物质在相同的条件下可有不同的Rf值。 因此，未知物与已知物（标准物质）在相同条件下进行展开比较Rf值可提供定性依据。 薄层色谱分析的实验器材 1.薄层板 市售薄层板 自制薄层板 (1). 玻璃板：10×10cm、10×20cm、5×20cm、20×20cm等。表面及四边要求光滑、平整（四角均为直角）、薄厚均匀、质地均匀。洗净后不应附水珠，于无尘处晾干，不应有斑痕，备用。必要时用前用酒精棉球擦净晾干。 (2). 铺板器：能使吸附剂在载体(玻璃板)上铺成一层厚度符合要求的平整、均匀的薄层。分自动铺板器和手动铺板器两种。手动铺板器包括铺板架和涂布器，涂布器用金属或有机玻璃均可，规格有0.2-1.0mm不等。 常用吸附剂 硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254 聚酰胺 硅藻土 氧化铝 纤维素 表面改性固定相 硅胶：具有表面活性、略带酸性（pH4-5）的多孔硅胶（Sio2·xH2O），是至今薄层色谱法使用得最普遍的薄层材料。 聚酰胺：属特殊类型有机薄层材料。具有表面酰胺基，对酚、羧酸、氨基酸等能形成氢键的物质具有特别的选择性。常用来鉴别黄酮、酚类化合物。 薄层板的制备：铺板，一般取一份吸附剂加三份水，研磨调成糊状，调制时慢慢搅拌，勿使产生气 泡。涂布厚度一般为0.3-0.5nm，室温下晾干。 薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果，薄层应尽量铺得均匀，厚度在0.25～0.5mm之间。 硅胶和氧化铝的粘性差，使用前必须加粘合剂。市售的硅胶G 和氧化铝G 均已含有粘合剂半水石膏，可直接加入水调匀后铺层。 薄层色谱分析的实验器材 2. 干燥板架：用于放置铺好的薄层板 3. 干燥箱：温度易于调控，用于活化薄层板。 4.干燥器：用于