抗凝活性肽rgd226基因构建表达产物纯化及活性分析.pdfVIP

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2018-11-16 发布于天津
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抗凝活性肽rgd226基因构建表达产物纯化及活性分析.pdf

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抗凝活性肽rgd226基因构建表达产物纯化及活性分析

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2002 年 10 月 ( ) CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 18 5 :583～587 抗凝活性肽 RGD226 基因构建、表达、产物纯化及活性分析 1) 2) 1) 杨兴文 , 　刘　俭 , 　唐建国 ( 1) 北京大学生命科学学院 , 蛋白质工程与植物基因工程国家重点实验室 , 北京　100871 ; 2) 中国医学科学院协和医科大学药用植物研究所,北京　100093) ( ) 摘要　通过 PCR 法 ,将来源于蛇毒蛋白质 eristostatin 中的一段含有RGD ArgGlyAsp 序列的十三肽 (SRVARGDWNDDYS) 的基因 , 以一个无胰岛素活性但保留天然免疫原性的胰岛素原突变体 (PJ G401) 基因为模板 ,置换其 B28 和 A1 位之间的连接肽基因 ,构建成了能展示 RGD 功能序列的人 ( ) 源化分子 RGD226 的基因. 通过该基因在大肠杆菌中的表达、产物分离纯化 ,得到高纯度 RGD226. μ 该 RGD 肽对由ADP 诱导的体外人血小板聚集的半抑制浓度 IC50 为223 molL. 其胰岛素免疫活性是 PJ G401 的 151 % ,提示其在一定程度上保留了胰岛素原的免疫原性. 其受体结合活性不到 PJ G401 的01 % , 说明其胰岛素的生物活性基本丧失. 动物实验证实 ,RGD226 在延长小鼠出血时间上具有较明显的作用. 关键词　突变胰岛素蛋白质骨架 ,RGD 肽 ,血小板聚集抑制 ,抗凝中图分类号　Q816 Gene Construction , Expression , Purification and Activity Analysis of Antiplatelet Aggregation Peptide RGD226 1) 2) 1) YANG Xingwen , LIU Jian , TANGJianguo ( 1) National Laboratory of Protein Engineering and Plant Gene Engineering , College of Life Sciences , Peking Universit