重组碱性成纤维细胞生长因子制作工艺简述.ppt

重组碱性成纤维细胞生长因子 工艺简述 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF） 碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor , bFGF）含155个氨基酸残基的单链蛋白质，分子量为18kD，是一种能促进各类细胞增殖的一种蛋白质分子，具有相当广泛的生理功能。 bFGF作用的靶细胞有成纤维细胞、血管内皮细胞、软骨细胞、成骨细胞、平滑肌细胞、神经原、神经胶质细胞、骨骼肌细胞、晶状体上皮细胞、角膜上皮细胞、肾上腺皮质、髓质细胞等[4]。目前已有研究证实，它在促新生血管生成、神经细胞及骨组织的再生，损伤愈合方面起着相当重要的作用[5-10]。由此可见，bFGF在临床上将会有非常广泛的应用前景。 bGFG分布 主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、胎盘等，尤以垂体含量最高，能纯化大量的bFGF（0.5 mg／kg），其它组织含量很少，约为其1／10～1／50。bFGF不存在或以极低浓度存在于血清和体液中。 ???? bFGF 作为细胞分裂原，主要作用在起源于中胚层和神经外胚层的骨骼肌细胞、成纤维细胞和骨细胞等，其受体也相应的分布于上述细胞表面。FGF存在两类受体：一类 是亲和力受体，属跨膜性酪氨酸蛋白激酶类受体；另一类是低亲和力受体，即肝素样受体，为硫酸乙酰肝素蛋白多糖类物质。它们是一条单链多肽，约 110～150 KD，受体数目约2×103～8×104／细胞，受体对bFGF的亲和力KD＝18～80 pm。受体至少有4种形式，由细胞外区、跨膜区、胞浆区的近膜区和酪氨酸激酶区组成，由于每种FGF受体均能和FGF家族每个成员结合，而不同FGF受体 的表达存在着组织细胞特异性。bFGF与受体亲和力显著大于aFGF 。 bFGF的生物学功能 bFGF 的生物学效应分体内和体外两大部分。体外作用十分强烈，成纤维细胞、骨细胞、软骨细胞、血管内皮细胞、肾上腺皮质和髓质细胞、神经元和神经胶质细胞等具有 很强的促细胞分裂增殖活性。体外细胞培养中能在低浓度（1 mg?ml－1）发挥其作用。bFGF是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子。 其主要生物学作用有：（1）作为血管生长因子； （2）促进创伤愈合与组织修复；（3）促进组织再生；（4）参与神经再生等。 重组牛碱性成纤维细胞生长因子介绍 1974年，英国Gospodarowicz教授从脑垂体中纯化出一种细胞生长因子，因首先发现对BALT/C3T3细胞等成纤维有明显的促分裂增殖活性，而被命名为碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）。 30年来，各国学者们研究发现，bFGF通过与细胞膜上的受体，广泛作用于外胚层、中胚层和内胚层多种来源的细胞，包括上皮细胞、粘膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞、骨骼肌细胞、卵巢颗粒细胞、成纤维细胞和神经细胞等，都具有促丝裂原作用和趋化作用，是一种与组织创伤的愈合过程密切相关的内源性活性因子，因此又被分子生物学家称之为“人体愈合素”。 本品系由高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后冻干制成。 成纤维细胞 外用重组牛碱性成纤维细胞生长因子外包装 重组牛碱性成纤维细胞生长因子制备及检验测定 一、 制备流程 1.1工程菌菌种 1.2原液制备 1.3半成品制备 1.4成品处理 二、相关检定 2.1 原液检定 2.2 半成品检定 2.2.1 生物活性检验 2.2.2 无菌检验 2.3 成品检定 三、 保存、运输 于2～8℃避光处保存和运输。自生产分装之日起，按批准的有效期执行。 四、 使用说明 应符合“生物制品包装规程”的规定和批准的内容。 最终产品图 The end... 1.1工程菌菌种 1.1.1名称及来源 重组牛碱性成纤维细胞生长因子工程菌株系由带有牛碱性成纤维细胞生长因子基因的重组质粒转化的大肠杆菌菌株。 1.1.2 种子批建立 应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的规定。 1.1.3 菌种检定 主种子批和工作种子批的菌种应进行以下各项全面检定。 1.2原液制备 1.2.1 种子液制备 将检定合格的工作种子批菌种接种于适宜的培养基（