分子生物学学生复习题答案.docxVIP

简答题1.简述Sanger法的DNA测序原理。利用DNA聚合酶，以待测单链DNA为模板，以dNTP为底物，设立四种相互独立的测序反应体系，在每个反应体系中加入不同的双脱氧核苷三磷酸（dideoxyribonucleoside triphosphate，ddNTP）作为链延伸终止剂。在测序引物引导下，按照碱基配对原则，每个反应体系中合成一系列长短不一的引物延伸链，通过高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，放射自显影检测后，从凝胶底部到顶部按5′→3′方向读出新合成链序列，由此推知待测模板链的序列 。2.简述遗传分析中用于点突变的代表性技术有哪些。等位基因特异性寡核苷酸（ASO）分子杂交 反向点杂交变性高效液相色谱DNA序列分析PCR - 限制性片段长度多态性分析3.简述基因治疗的策略。（1）缺陷基因精确的原位修复基因矫正基因置换（2）基因增补（3）基因沉默或失活4.简述基因治疗的基本程序。1.选择治疗基因2. 选择携带治疗基因的载体3.选择基因治疗的靶细胞4.在细胞和整体水平导入治疗基因5.治疗基因表达的检测5.简述癌基因活化的机制。①获得启动子与增强子②染色体易位③基因扩增④点突变6.简述RB基因（视网膜母细胞瘤基因。抑癌基因）的作用机制。①非磷酸化形式有活性，抑制细胞增殖②对肿瘤的抑制作用与转录因子E-2F有关③低磷酸化Rb能结合E2F-1使之失活，细胞周期进展受抑，不能通过G1-S关卡。④高磷酸化Rb不能结合E2F-1，相关基因开放，促进细胞通过G1-S关卡，细胞增殖。7.简述原癌基因的产物及功能。1. src家族 —— 酪氨酸蛋白激酶（信号转导类蛋白）2. ras家族 —— P21蛋白（GTP酶活性）3. myc家族 —— 核内DNA结合蛋白（核内转录因子类）4. sis家族 —— P28（类人血小板源生长因子)（生长因子类）5. myb家族 —— 核内转录因子（核内转录因子类）6. erb家族——生长因子及其受体和蛋白激酶8.简述印迹技术的分类及应用。DNA印迹 (Southern blotting)用于基因组DNA、重组质粒和噬菌体的分析。RNA印迹 (Northern blotting)用于RNA的定性定量分析蛋白质的印迹 (Western blotting)用于蛋白质定性定量及相互作用研究。9.简述 PCR 反应体系的基本成分、 PCR 的基本反应步骤和主要用途。成分：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶、dNTPs、Mg2+步骤：变性、退火，延伸用途：（一）目的基因的克隆（二）基因突变DNA和RNA的微量分析（四）DNA序列测定（五）基因突变分析10.Southern blotting为什么要进行预杂交？预杂交是为了筛选有利的变种....为了获得目的物种，就需要预先的杂交筛选工作11.DNA的损伤的原因是什么?体内因素-诱发DNA“自发损伤”DNA复制错误DNA自身的不稳定性机体代谢过程中产生的活性氧（ROS）体外因素物理因素（电离辐射、紫外线）化学因素（自由基，碱基类似物，碱基修饰剂、烷化剂，嵌入性染料）生物因素（黄曲霉毒素）12.简述碱基切除修复的大致过程。在多种酶的作用下，先将损伤区域切除，然后利用互补链为模板，合成一段正确配对的碱基顺序来修补。（作用过程：识别并切除→修复合成并连接）13.真核生物基因及基因组的结构特点各是什么？基因：真核基因的基本结构（断裂基因）基因编码区编码多肽链和特定的RNA分子调控序列参与真核基因表达调控基因组：基因的编码序列少有大量的重复序列存在多基因家族和假基因有可变剪接DNA+蛋白质→染色体体细胞的基因组为二倍体14.简述质粒的基本特征。①是细菌细胞内、染色体外共价闭合环状DNA分子②能够独立于细胞的染色质DNA而进行复制③对宿主细胞的生存不是必需的④能赋予细菌特定的遗传性状15.真核生物染色质活化有哪些主要表现？论述题1.试述基因诊断的特点及基本技术。特点：针对直接病因诊断特异性强，灵敏度高适应性强，诊断范围广目的基因是否处于活化状态均可，无组织和发育特异性在感染性疾病的基因诊断中，可检测正在生长的病原体或潜伏病原体基本技术：①核酸杂交（斑点印迹、Southern印迹、Northern印迹、原位杂交、等位基因特异寡核苷酸探针杂交）②聚合酶链反应（具体）③DNA测序（具体）④基因芯片技术（具体）限制性内切酶酶谱分析法2.举例说明原癌基因和抑癌基因是如何调控细胞增殖和凋亡的。(1)??原癌基因的编码产物是生长因子、生长因子受体、胞内信号转导分子、转录因子、cyclin及CDK等。(2)???正常情况下，原癌基因的编码产物为细胞生长所必需。如ras编码Ras蛋白，是一种小G蛋白，参与细胞内生长信号的传导，从而促进细胞的生长。(3)???特定条件下，原癌基因通过点突变、DN