肺心汤对低氧性肺动脉高压大鼠模型vegf、hif-1α及phd1表达的影响及作用机理的分析word论文.docxVIP

RT-PCRreversetranscription-polymerasechain reaction逆转录聚合酶链反应SABCstreptavidin-biotin complex链酶亲和素-生物素-过氧 化物酶复合物ET-1endothelin-1内皮素-1RVright ventricle右室LVleft ventricle左室Sseptum室间隔ODDoxygen dependent degradation domain氧依赖性降解区pVHLvonHippel–Lindautumoursuppressor protein肿瘤抑制蛋白TAD transactivation domain 转录激活区C-TAD carboxy-terminal transactivation domain 羧基端反式激活区 N-TAD amino-terminal transactivation domain 氨基端反式激活区 ET-1 endothelin-1 内皮素-1肺心汤对低氧性肺动脉高压大鼠模型对VEGF、HIF-1α 及 PHD1 表达的影响及作用机理的研究研究生：贺洪军导师：戴爱国教授中文摘要背景：低氧性肺动脉高压（HPH）是由低氧引起的肺血管内皮细胞损伤 后，血管内皮合成和分泌的各种舒缩因子平衡失调导致早期的肺血管收缩以及 后期的肺血管重塑(HPSR)而产生的。HIF-1 在低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖 中起重要作用，HIF-1α 是 HIF-1 功能性亚基，调控多种涉及低氧应激下细胞适 应与存活的靶基因，从而在低氧应答反应中起核心作用，低氧下 HIF-1α 在胞质 中大量积累，转移到胞核中与 HIF-1β形成异二聚体从而上调 VEGF 等多种下 流靶基因的表达,VEGF 通过诱导细胞增殖和微血管通透性在 HPH 的发病机制中 发挥作用。PHD1 促使 HIF-1α 脯氨酸残基羟基化并调节其对氧稳定性。肺心汤 是我室多年治疗肺心病的经验方，具有选择性降低肺动脉高压作用，但作用机 理尚不清楚。目的：探讨肺心汤对 HPH 模型大鼠肺小动脉壁及肺组织 VEGF、HIF-1α及 PHD1 的影响及其治疗 HPH 的作用。方法：将 40 只健康雄性 SD 大鼠随机分为正常对照组、模型组、肺心汤组 和硝苯地平组，每组 10 只。采用常压间断缺氧法复制 HPH 大鼠模型。采用右 心导管法测定大鼠平均肺动脉压（mPAP），采用称量法计算右心室肥大指数（RVHI），并进行 HPSR 指标观察。免疫组织化学和原位杂交技术分别检测肺 小动脉 VEGF、HIF-1α、PHD1 蛋白质水平及 mRNA 水平表达；免疫印迹技术 和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测肺组织 VEGF、HIF-1α、PHD1 蛋白质水平及 mRNA 水平表达。结果：与正常对照组比较，模型组 mPAP、RVHI、WA%、WT%、肺小 动脉壁及肺组织 VEGF、HIF-1α 蛋白及 mRNA 水平表达明显升高(P0.01)，但 PHD1 蛋白及 mRNA 水平表达明显降低(P0.01)；与模型组比较，肺心汤组 mPAP、RVHI、 WA%及 LA%，肺小动脉壁及肺组织 HIF-1α 和 VEGF 蛋白及 mRNA 表达 明显 降低 (P0.01) ， PHD1 蛋白 及 mRNA 水平 表达 明显 增高 (P0.01)。但未达到正常水平（P0.01，P0.05），与对照组比较，硝苯地平组 mPAP、RVHI、WA%、LA%、肺小动脉壁及肺组织 VEGF 及 HIF-1α 蛋白及 mRNA 水平表达升高(P0.01，P0.05)，PHD1 蛋白及 mRNA 水平表达明显降 低(P0.01)，与模型组比较，硝苯地平组 mPAP 降低(P0.01)，RVHI、WA%及 LA%无明显变化（P＞0.05），肺小动脉壁 VEGF 蛋白水平表达减低(P0.05)， VEGF mRNA 水平，肺小动脉壁 HIF-1α 及 PHD1 蛋白及 mRNA 水平，肺组织 VEGF、HIF-1α 及 PHD1 蛋白及 mRNA 水平表达无统计学意义（P＞0.05）结论：（1）肺心汤通过降低 HIF-1α 的表达而下调其靶基因 VEGF 的表 达，部分逆转肺血管平滑肌重塑可能是其治疗 HPH 的作用机制之一。（2）肺心汤可能通过增高 PHD1 的表达促使 HIF-1α 降解而治疗 HPH。关键词：肺心汤；血管内皮生长因子；低氧诱导因子1；α亚基；脯氨酸 羟化酶。本研究受湖南省中医药科研计划项目重点课题(No.2009007) 资助English AbstractInfluence and Mechanism of Feixin Decoction on the Contents of