兰花组织培养技术研究应用.pptVIP

石戈和吴婷婷（2006）发现高压静电场促进舟山春兰愈伤组织的生长。 有研究测试了二氧化碳对兰属类原球茎增殖的效果，发现高浓度二氧化碳只有在低浓度蔗糖中才产生有益作用（吴应祥，1992）。 何篙等（1994）观察到乙烯抑制剂硝酸银可大大加快春兰和墨兰杂交种根状茎的分化频率。 蕙兰组织培养的主要步骤 原球茎诱导： 培养基为MS+NAA0.5mg/L+BA0.5mg/L+椰子汁100mg/L +蔗糖20g/L+琼6g/L脂.弱光下25摄氏度培养，3-4个月可见原球茎生长，初期为白色，置培养架上每天12小时，光强1500-2000lx，原球茎迅速转绿，不久伸长形成根状茎。 花径和花器官也可以作为外植体，花芽分化形成在生长停顿前采取最佳，NAA5-10mg/L，2,4-D0.2-1 mg/L 兰花组织培养技术研究 齐鲁兰苑 兰花组织培养三个关键期 1、原球茎的诱导 2、原球茎的继代培养（根状茎） 3、壮苗培养 1、洗涤、消毒 新玻璃器皿的洗涤：在1%HCL溶液中浸泡一昼夜，然后用水冲洗，再用肥皂水刷洗1次，反复用水冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗1遍，晾干备用（通过洗涤除去对培养物有害的碱性物质和其他杂质） 用过器皿的洗涤：除去器皿中残渣，用清水冲洗，再用浸过肥皂水或合成洗涤剂的毛刷刷洗，用清水冲洗干净，最后用少量蒸馏水冲洗1次，晾干待用。 植物激素的配制 ? 1） IAA IBA GA3先溶与少量95%酒精，再加水定容到一定浓度。??? 1N NaoH 2） NAA可溶于热水或少量95％的酒精中，再加水定溶到一定浓度。? 1N NaoH 3） 2，4－D不溶于水，可用1mol的NaOH溶解后，再加水定容至一定浓度。 ??? 4） KT和BA先溶于少量1mol的HCl中，再加水定容。 ??? 5） 玉米素先溶于少量95％酒精中，再加水至一定浓度。 ” 组织培养 1外植体的选择 2培养基的选择 3培养方式的选择 4植物生长调节剂的影响 5附加物对根状茎增值与分化的影响 6分割方式的影响 7光照的影响 8活性碳的影响 9糖浓度的影响 10其他影响因素 组织培养：就是分离植物体的一部分，如茎类、芽、叶、花、幼胚等，在无菌试管，并配合一定的营养、激素、温度、光照等条件，使其产生完整植株。由于其条件可以严格控制，生长迅速，1-2个月即为一个周期，因此在花卉植物的生产上有重要应用价值。 培养程序：外植体--诱导形成类原球茎--类原球茎大量增殖--分化出小植株--生根壮苗培养--温室栽培--室外栽培 1外植体的选择 Bernard（1899）年首次分离出兰花的根菌，并用其感染兰花的种子进行萌发试验，创立了兰花种子共生萌发的方法。 孙志栋等（2006）用春兰的种荚成功诱导出原球茎。 黄磊等（2004）用春兰和大花蕙兰（C. hybrids）的杂交种子，经非共生萌发得到了无菌试管苗。 种子消毒的方法 先用镊子取出花粉块，轻轻放在柱头上。授粉成功后，子房逐渐膨大，结果。剪下果实。用75%浸泡30S,倒人次氯酸钠溶液消毒20MIN，蒸馏水洗净4次,切开果实,播在培养基上，进行无菌繁殖，3-4个月就可发芽。 种子成熟度对发芽的影响 郑 琪，赵虎等（2007年）用春兰（小打梅）×春兰（绿壳素）、进行实验，发现未成熟种子的发芽速度最快，快的30 d发芽，最慢的60 d发芽均比同组合的成熟种子提早发芽。 邢 海，褚剑峰等（2007年）用春兰（外碟）×春兰（大富贵）组合的种子进行实验研究表明采集的未成熟种子的发芽率较高，最高的达到60％，最低的也有20％ ，均高于同组合的成熟的种子发芽率。 茎尖消毒方法 先在栽培2、3年的兰株根部．切取2～3 cm的生长芽。用流水冲洗20 min。在温度为22～25℃的无菌组培室里。把最外面的l～2片苞叶去掉，放在次氯酸钠溶液中浸泡l5 min，灭菌。然后剥离。切割成2～5 mm的茎尖，接种到准备好的培养基上，移至培养场所。3~4个月后发出根状茎。 B5 培养基上的根状茎增殖较快，培养50 d后根状茎呈深绿色，部分开始褐化。1／2MS固体培养基上的根状茎直径较大，生长粗壮，颜色嫩绿，生长状况明显优于B5。 B5培养基有利于根状茎短期的快速增殖，长期继代培养及保存宜选用1／2MS固体培养基。 余道平（2005）在春兰离体培养时，采用了MS、1/2MS和改良MS三种培养基，结果发现以1/2MS为基本培养基效果最好，改良MS次之，最差的是MS。 3培养方式的选择 兰花的培养方式有固体培养、液体培养和液——固培养等3种 傅向东等（1997）；张菊野等（1993）发现春兰原球茎生长与分化成苗在液体培养时有较好结果。 周全，余平（