实验二 血清蛋白质酣酸纤维薄膜电泳.pptVIP

* 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 Electrophoresis on cellulose-acetate membrane of serum proteins 电泳—带电的质点在电场中向电性相反方向移动 的现象。 电泳的基本原理： 在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F＝QE 质点的前移同样要受到阻力（F’）的影响，对于一个球形质点，服从 Stoke定律，即：F′＝6πrην r为质点半径， η为介质粘度，ν为质点移动速度 当质点在电场中作稳定运动时： F＝F′即 QE＝6πrην 可见，球形质点的迁移率，首先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。 F′＝6πrην ’ 影响电泳迁移率的因素 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗 影响电泳迁移率的因素 ⒈电场强度 电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。电场强度大，带电质点的迁移率加速，但因产生大量热量，对电泳有影响而不宜过大。 ⒉溶液的pH值 溶液的pH决定被分离物质质点的带电性质及所带净电荷量。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。 ⒊溶液的离子强度 电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低，然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的 pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。 ⒋电渗 在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗（electro-osmosis）。其产生的原因是固体支持物多孔，且带有可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离子或负离子，使溶液相对带负电或正电向相反电极移动，若与质点在电场中移动的方向相同，结果质点的表现速度比其固有速度要快，若与质点移动的方向相反，其表现速度比其固有速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。 电泳的分类 电泳法可分为自由电泳（无支持体） 区带电泳（有支持体） 滤纸电泳 薄层电泳（薄膜及薄板） 凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、 淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶） 电泳分析常用方法 （一）醋酸纤维素薄膜电泳 （二）凝胶电泳（聚丙烯酰胺凝胶电泳） [SDS(Sodium dodecyl sulfate ) （十二烷基硫酸钠） 聚丙烯酰胺凝胶电泳法] （三）等电聚焦电泳技术 实验原理 血清蛋白质的等电点为5左右，在pH为8.6的 缓冲液中带负电，在电场中向正极移动，由于不同的蛋白质的分子形状、分子大小及带电量的多少不同，在电场中泳动的速度不同而分离为不同的区带，经染色可见5个区带。染色后可洗脱进行比色定量。 实验步骤 2cm 毛面 _ + 1、点样 2、电泳45~50分钟（120V） 1 2 3 3、染色及漂洗 浸入染色液中 3 ~5分钟 *