黑茶茯砖茶发酵中优势菌与有害菌类的分离鉴定.doc

黑茶茯砖茶发酵中优势菌与有害菌类的分离鉴定 　　 　　获砖茶具有“提神解渴，消积化食”的 　　功用，素为我国西北牧区少数民族及其邻近 　　国家居民喜好之饮料，年销售量达一百多万 　　担之巨。但就其品质而言，尚无科学之检验方 　　法，历来均以生黄霉菌愈多者为佳。据云黄霉 　　菌有改进获砖茶滋味及汤色的作用。本研究 　　在于分离鉴定获砖茶发酵中的优势菌及有害 　　菌类，以寻求优良菌种，业为提高获砖茶品 　　质，改进发酵工艺提供科学依据。 　　一、实验材料与方法 　　分离材料:采自湖南益阳茶厂的优质获 　　砖茶、普通获砖茶及霉变获砖茶样品各一 　　份。 　　培养基:采用马丁氏琼脂、茶汁琼脂及 　　肉美琼脂三种。茶汁琼脂的配制方法如下: 　　茶叶煮汁的制备: 　　称取原料茶50克加水1000m1,煮沸30分 　　钟过滤即得。注意补足蒸发水分。 　　配方 　　茶叶煮汁1000 m1 　　葡萄糖10克 　　KZ HPO‘0, 5克 　　MgS04.7H20 0,5克 　　pH5,0 0.5公斤30分钟灭菌 　　分离及计数:采用涂抹平板法进行。稀 　　释液制备系以无菌操作称取去掉茶梗的样品 　　5克，置50 m1装有玻璃球的三角瓶中.于振 　　荡机上振荡15分钟，然后逐级稀释至10一 e, 　　接种稀释度为10-3, 10-. 10-5, 10-e四个 　　稀释度，每个稀释度4个重复。 　　二、结果与分析 　　谷本研究承益阳茶厂大力支持.周铁安、孙胜力同 　　志热h介绍工艺及有关情况旅协助采集样品，在此一并 　　致谢。 　　(一)优势种及有害菌的鉴定 　　1.对优势菌(黄霉菌)的鉴定 　　对自马丁氏琼脂及茶汁琼脂上分得的优 　　势菌获1、获2,获3,获4等四个菌株进 　　行了培养观察，其各项特征完全相同，现一 　　}lf}详述如下: 　　在Czapeks琼脂上，菌落从袖黄至橙 　　黄色老年培养转为浅褐黄色至褐色。背面为 　　橙黄色。分泌褐色索于基质中。菌落生长较 　　缓，接种后(2 8 0C)3天才出现肉眼可见之 　　菌落。经镜检菌落全由于囊果一与菌丝组成， 　　未发现分生抱子。在加有微量营养基质的载 　　片」:，菌落特征为中心区域发育着大量橙黄 　　色子囊果，边缘则为黄绿色的分生袍子梗 　　丛。一户囊果黄色，球形或近似球形，直径 　　100-142, 8 EL;子囊球形，橙黄色，直径约 　　10 !} ,每个子囊含有8个子囊饱子;子囊抱 　　子淡黄绿色，光滑，似皮带轮，直径 4, 4- 　　5, 8 w，厚3.4-.4.3 E};分生抱子使长度变化 　　较大，顶囊宽约24 !};小梗直接生于顶囊上， 　　9, i-7. 3 ; 2, 3-2, 9 !};少数小梗增一长而形 　　成细短梗，_上生次级小穗;分生抱子穗放射 　　形.较大;分生抱子球形，刺面，直径4, 4- 　　5. 8 E}。 　　据上述各项特证，特别是其主要特征子 　　囊果和子囊抱子的大小及颜色，与舍氏曲霉 　　(:lspergillus chevalieri)J}}本相A。故 　　鉴定为 A, chevalicrio 　　2.有害菌类的鉴定 　　(1)x.J.优势有害菌(黑霉菌)获5, 　　庆14的鉴定 　　二菌株各项基本特征如卜: 　　在Czapeks琼脂上，菌落初为白色渐 　　转淡黄同时开始自一基质形成分生抱子便，随 　　着分生抱子的成熟而变为淡褐色至黑褐色， 　　由于先后所生之分生抱子头色泽不同而形成 　　同心环纹。14号菌株与5号菌株在下列特征 　　上略有区别，即14-号菌株的分生抱子头稍 　　大，分生袍子梗略长，抱子头的颜色较深， 　　呈深黑色，有露珠。二菌株的其他特征为分 　　生抱子梗光滑，长560-1428 u，宽13,2一 　　16.2 w，顶囊球形，宽27-48 N;小便6.76- 　　7,3x31。间细胞长23, 8-26. 5 N};分生抱 　　子5号菌株2,9-3,8N}, 4号菌株3, 5- 　　4。4u。 　　据上述各项特征。5号菌株与14号菌株 　　在某些特征上虽有微小差别，但其主要特 　　征，即分生抱子的大小和颜色，间细胞长短 　　等均与黑曲霉(Aspergillus niger)基本 　　相同，故鉴定为A, nigero 　　(2)对次要有害菌(绿霉菌)获12一号 　　菌株的鉴定 　　获12号菌株的各项特征如下: 　　在Czapek s琼脂上，菌落蓝绿色至橄 　　榄绿，老年培养转为暗绿色。全致析绒状，菌 　　落边缘具有一圈由不育菌丝组成的白边，背 　　面淡黄或淡棕色。分生抱子穗大多呈坚固的 　　直柱状。小梗长7, 3-11. 6 !}，宽约3w。分 　　生抱子球形，光滑，直径约3 !a。将该菌培养 　　} Czapek氏液中，取其滤液与2%