标记抗体技术应用与发展.pptVIP

标记抗体技术;;标记抗体;免疫酶标记技术;;;　免疫酶相关的免疫制备技术;Preparation of Polyclonal Antibodies;Preparation of Monoclonal Antibodies;抗体纯化;硫酸铵盐析;例：兔抗鸭IgG的提纯(辛酸—硫酸铵沉淀法);免疫的亲和层析 将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中 那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液， 改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。;免疫酶相关的免疫制备技术;三、抗体的酶标记;过碘酸钠法;过碘酸盐氧化法;戊二醛交联标记法;一步法;二步法;戊二醛交联法（二步法）;ELISA;免疫酶技术(enzyme immunoassay)： 是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 就是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。;酶联免疫吸附试验ELISA （enzyme linked immunosorbent assay） 是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。;常见的酶联免疫吸附试验;间接ELISA检测抗体;;ELISA的一般步骤（以间接ELISA为例）;操作步骤及步骤;ELISA板（条）;包被用抗原的种类;克隆表达及纯化的蛋白;全微生物抗原：病毒和细菌;纯化的微生物组分：荚膜多糖、天然蛋白;经过载体偶联的小分子半抗原; ;;洗涤;加入一抗;加入酶标二抗;显色;;酶反应终止液;;读数和结果判断 ;酶标仪;ELISA检测抗原;夹心ELISA检测抗原;ELISA检测抗体;;竞争ELISA检测抗原;;免疫组化;;Direct method;免疫组化 ( 三步法 ) 操作步骤;;Indirect method;Fluorescence Method;免疫组织化学的临床应用;Dot-ELISA斑点酶联免疫吸附检测 ;纤维素薄膜(NC)作固相载体，代替了聚苯乙烯反应板，因建立Dot-ELISA的原理与常规ELISA相同，故常规ELISA可用Dot-ELISA代替，用于抗原、抗体的定性和定量等方面的检测。 与常规的微量板ELISA比较，Dot-ELISA具有简便、节省抗原??优点，而且结果可长期保存；但其也有不足，主要是在结果判定上比较主观，特异性不够高等。该方法的主要操作程序为：;;加酶标抗体，37℃反应一定时间后，用洗涤液洗三次 显色　加入新鲜配制的底物液,加蒸馏水洗涤终止反应 结果判定　以阳性、阴险血清作为对照，膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应，否则为阴性反应;;谢 谢