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水蕨孢子叶离体培养试验 　　摘要：试验用水蕨［Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓＢｒｏｎｇｎ］的孢子叶为外植体，研究了水蕨离体培养获得再生植株的方法，建立了水蕨孢子叶离体萌发获得再生植株的培养体系，通过试管苗的移栽获得了健壮生长的盆栽苗。 　　关键词：水蕨；孢子叶；离体培养 　　中图分类号：Ｑ９４９．３６＋７；Ｑ９４３．１ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８11406－1208-03 　　 　　Study on the Method of Regeneration Plant Through Ceratopteris thalictroides 　　Vitro Culture 　　ＣＡＩ Ｈａｎ－ｑｕａｎ，ＬＩ Ｆｅｎ－ｌｉｎｇ 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｓｐｏｒｏｐｈｙｌｌ ｏｆ Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ Ｂｒｏｎｇｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ． Ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈｙ ｐｏｔｔｅｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ｔｈｅ ｔｅｓｔ－ｔｕｂｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓ Ｂｒｏｎｇｎ； ｓｐｏｒｏｐｈｙｌｌ； ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ 　　 　　水蕨［Ｃｅｒａｔｏｐｔｅｒｉｓ ｔｈａｌｉｃｔｒｏｉｄｅｓＢｒｏｎｇｎ］为水蕨科水蕨属一年生水生或湿生的同型孢子蕨类植物，多生于池塘、水田或水沟中；水蕨为模式植物，有营养叶和孢子叶两种，分别进行孢子繁殖和无性繁殖［１，２］；在生活史中具有明显的世代交替现象，是遗传学、分子生物学和发育生物学研究的理想材料［３］。水蕨当年成熟的孢子有较高的萌发率，但是冬天的低温很容易把未成熟的幼苗冻死，故野外的繁殖率低，这也是造成水蕨濒临灭绝的原因之一［４］，现已被列为国家二级重点保护野生植物［５］。水蕨的经济价值较高，能食用，可做成名贵可口的菜肴［６］；并且因其造型美观和稀有，可用于园艺栽培［７］；还可药用，有活血、解毒功效，可治痞积、痢疾、胎毒和跌打损伤等病症［８］；具有较高的开发应用前景。目前对水蕨的研究主要集中在分类地位、生活史过程等方面［９－１１］，笔者曾对水蕨的快速繁殖做过试验［１２］，本试验研究了水蕨孢子叶离体培养的方法，建立了孢子叶离体培养获得再生植株的培养体系，以期为水蕨种质资源的保存与深度开发提供技术支撑。 　　１材料与方法 　　１．１取材和消毒处理 　　野生水蕨采自潮州市红山森林公园，选用其孢子叶为外植体。将整株水蕨清洗干净，去掉根和黄叶，再用洗衣粉上清液清洗１次，流水冲洗２ ｈ，去除尘垢后取出，放入已灭菌的烧杯中；在超净工作台上用０．１％升汞浸泡３次，每次３ ｍｉｎ，且前２次浸泡后都用去离子水清洗５次，最后１次浸泡后用去离子水清洗８次；再将材料修剪成０．５ ｃｍ×１．０ ｃｍ大小的小段，备用。 　　１．２方法 　　１．２．１孢子的离体萌发培养以ＭＳ为基本培养基，加入的植物激素有６－ＢＡ、ＮＡＡ、ＫＴ、２，４－Ｄ，组成试验所需的Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５共计５种培养基，各培养基均含０．９２％的琼脂、３０％的蔗糖，ｐＨ值为６．５～７．０，于高压灭菌锅中１２１灭菌２０ ｍｉｎ，冷却，待用。将消毒好的孢子叶外植体分别接种于Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３、Ｂ４、Ｂ５培养基中，每种培养基接种１４瓶，每瓶接种３个外植体，每种培养基计接种４２个外植体；接种完毕放入培养室中进行培养，培养室环境的温度为２２～２４、光照时间是１２ ｈ／ｄ、光照强度为１ ０００～１ ５００ ｌх。 　　１．２．２试管苗的移栽取水蕨野外生长地的泥土，等比例混合河沙作为移栽基质，装盆前所有基质均在１２１蒸气压力条件下消毒３０ ｍｉｎ，然后将其分别装入育苗盘中，制作移栽用的苗床。将生出根的试管苗炼苗后接入苗床，进行移苗试验。 　　２结果与分析 　　２．１水蕨孢子离体萌发 　　消毒处理后的水蕨孢子叶接种于孢子离体萌发的各种培养基中，培养２０ ｄ后观察孢子萌发状况和原叶体、孢子体生长状况，结果见表１。从表１可见，水蕨孢子叶中有大量的孢子，接种后４～５ ｄ孢子开始萌发，７～８ ｄ形成丝状体，约２周后发育成片状体，此时肉眼可见孢子叶上长出绿色点状物，到２０ ｄ左右形成肉眼可见的心脏型原叶体，也就是配子体；继续培