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第二节 血液学及血液化学检查 血常规检查 兽医学上的血常规一般是指： 1、红细胞计数 2、白细胞计数 3、白细胞分类计数 4、血红蛋白测定 5、血沉测定 血液标本的采集和处理 血液标本的采集是分析前质量控制的重要环节。 某些生理因素，如采食、运动和兴奋等，均可影响血液成分。甚至一日之间，白细胞总数、嗜酸性粒细胞绝对值、淋巴细胞各亚群的比例等参数均有一定的波动。服用某些药物可能明显干扰实验，得出假象结果。因此采血时，应询问是否服用过明显干扰试验的药物（如阿司匹林对血小板聚集的抑制作用）关尽可能在一定时间在避免干扰因素条件下进行，以便于比较和动态分析。 采血时的注意事项 注射器和容器必须干燥，抽血时避免产生大量泡沫，采血后应先拔掉针头，然后将血液徐徐注入标本容器。否则可能导致溶血。溶血标本不仅红细胞数，红细胞比积降低，血清化学组成也会产生变化，影响钾、镁、转氨酶等多项指标的测定。有些试验需用具有严密塞紧的，洁净的橡胶或塑料塞子的玻璃或塑料管作采血及储存器。 血液标本的保存条件非常重要，不适当保存直接影响实验结果。文献报导，即便将血浆放在4℃冰箱内保存，24小时后的因子活性也仅为采血后即刻实验结果的5%（减少95%），而供血液分析仪进行细胞计数的血液只能在室温下保存，低温保存可使血小板计数结果减低。因此，应根据实验项止确定最佳的保存条件。 三、抗凝剂 抗凝剂种类很多，性质各异，必须根据检验止的适当选择，才能获得预期的结果。现将实验常用抗凝剂及其使用方法简述如下： 1、乙二胺四乙酸（EDTA）盐 EDTA有二钠、二钾和三钾盐。均可与钙离子结全成螯合物，从而阻止血液凝固。 EDTA盐经1000C烘干，抗凝作用不变，通常配成15g/L水溶液，每瓶0.4ml，干燥后可抗凝5ml血液。EDTA盐对红、白细胞形态影响很小，根据国际血液学标准公委员会（International committee standard of hematology ,ICSH）1993年文件建议，血细胞计数用EDTA二钾作抗凝剂，用量为1.5-2.2MG （4.45±0.85μmol）/ml血液。EDTA-NA与EDTA-K2对血细胞计数影响均较小，但二钠溶解度明显低于二钾，有时影响抗凝效果，其他抗凝剂不适合于血细胞计数。　 2.枸椽酸钠（trisodium citrate）枸椽酸盐可与血中钙离子形成可溶性螯合物，从而阻止血液凝固。 枸椽酸钠有等多种晶体。通常配成32g/l水溶液，与血液按1：9比例使用。枸椽钠对凝血V因子有较好的保护作用，使其活性减低缓，故常用于凝血象的检查，也用于红细胞沉降率的测定。因毒性小，是输积压保养中的成分之一。 由于枸椽酸钠溶液是按体积比例加入血液内达到抗凝目的的，而抗凝剂主要是作用于血浆成分，通常所谓的1：9比例抗凝的概念是按1份体积的抗凝剂作用9份红细胞比积正常血液内的血浆成分而言。所以如果对贫血或红细胞增多症患畜的血液仍按1：9的比例加入抗凝剂时，就会发生抗凝剂不足或相对过多，这将明显地影响凝象检查结果。为了避免这种现象，有文献报道应根据抗凝剂用量（ml）=0.00185×血量×（100—病人红细胞比积%）这一公式，来计算抗凝剂的用量。 3．肝素（heparin）肝素广泛在于肺、肝、脾等几乎所有组织和血管周围肥大细胞和暑碱性粒细胞的颗粒中。它是一种含硫酸基团的粘多糖，是分散物质，平均分子量为15000（2000-40000）。肝素可加强抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）灭活丝氨酸蛋白酶，从而具有阻止凝血酶形成，对抗凝血酶和阻止血小板聚集等多种作用。每毫升血液抗凝需要持素15±2.5IU 。尽管肝素可以保持红细胞的自然形态，但由于其常可引起白细胞聚集关使用涂片在罗氏（）染色时产生蓝色背景，因此肝素抗凝血不适全血液学一般检查。肝素是红细胞透渗脆性试验理想的抗凝剂。 溶血的原因： （1）血从注射器推注到试管时没取下针头（2）针尖在V中探来探去（3）混匀时，用力过大（4）血肿块取血（5）病人本身有溶血性疾病（6）渗透压的改变（7）酒精未干抽血（8）注射器与针头连接不好，有漏气 血涂片的制备和细胞染色 血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比较观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。 1．瑞特（Wright）染色法 ：为观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须进行染色。血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。目前常用瑞特染色法。 2．吉姆萨（Giemsa）染色法 ：吉姆萨染液由天青，伊红