0届《世纪金榜》高考一轮生物复习选修.ppt

考点二 PCR技术和分离蛋白质? 1.细胞内DNA复制与PCR技术的比较: 体外迅速扩增 边解旋边复制, 半保留复制 特点 无转录、需加入两种引物 伴有转录、 产生引物 是否有 转录 耐高温的TaqDNA聚合酶 解旋酶、DNA聚合酶 酶 不需ATP提供能量 ATP提供能量 能量 细胞外 细胞内 场所 不 同 点 PCR扩增 DNA复制 项　目 都需要与模板相结合的引物 引物 DNA 模板 严格遵循碱基互补配对原则 复制原理 四种脱氧核苷酸 原料 相 同 点 需要严格控制温度 变化的温控设备 无 设备 需要人为控制 不需要 缓冲液 30多次 受生物体自身控制 循环 次数 不 同 点 PCR扩增 DNA复制 项　目 2.PCR过程: (1)变性:当温度上升到90℃以上时,双链DNA解聚为单链。 (2)复性:温度下降到50℃左右,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 (3)延伸:温度上升到72℃左右,溶液中的四种脱氧核苷酸(A、T、C、G)在DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 3.PCR技术和分离蛋白质的比较: 为蛋白质的研究和利用提供了原材料 解决了DNA研究中材料 不足的问题 实验 意义 相对分子质量不同的蛋白质得以分离 获得大量DNA 实验 结果 样品处理和粗分离→凝胶色谱操作 变性→复性→延伸 实验 过程 依据相对分子质量的大小不同来分离蛋白质 利用DNA热变性原理体外扩增DNA 实验 原理 分离蛋白质 PCR技术 【高考警示】 PCR技术操作的四个注意事项 (1)要进行灭菌操作:为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。 (2)移液器枪头每用一次必须更换:在微量离心管中添加反应成分时,每吸取一种试剂后,移液器上的枪头必须更换。 (3)要确保反应液集中在离心管底部:所有的成分都加入后,盖严离心管口的盖子,用手指轻轻弹击管的侧壁,混匀后离心处理。 (4)要确保反应成分用量的准确性和程序设置的正当性:用量不当、漏加成分、PCR程序设置不当等,均有可能导致DNA片段扩增的失败。 【通关题组】 1.(PCR与DNA复制的比较)(2014·苏州模拟)PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比,主要有两点不同,它们是　(　　) ①PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA ②PCR过程不需要DNA聚合酶 ③PCR过程中DNA的解旋不依靠解旋酶,而是通过对反应温度的控制来实现的 ④PCR过程中,DNA不需要解旋,直接以双链DNA为模板进行复制 A.③④　　　　B.①②　　　　C.①③　　　　D.②④ 【解题指南】解答本题的关键: (1)明确PCR过程不需要解旋酶。 (2)掌握PCR过程需要人为添加单链DNA或RNA作为引物。 【解析】选C。PCR过程与细胞内的DNA复制过程相比较,主要有两点不同:(1)PCR过程需要的引物是人工合成的单链DNA或RNA,长度通常为20～30个核苷酸。(2)PCR过程中,DNA解旋不依靠解旋酶,而是通过对反应温度的控制来实现的。 2.(血红蛋白提取的流程及相关原理)(2014·连云港模拟)红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的功能主要是由血红蛋白完成的,血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2。我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。 根据材料回答下列问题。 (1)实验前取新鲜血液,要在采血器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是　 。 (2)在对样品进行处理时,主要包括　　　　　　　　、血红蛋白的释放、分离血红蛋白溶液、透析等步骤。其中透析技术的原理是　 。 (3)同学甲利用琼脂糖凝胶电泳技术将得到的蛋白质进行分离,在电泳过程中,影响蛋白质迁移速率的因素包括蛋白质分子的　　　　　、　　　　　　以及分子的形状等。 (4)同学乙利用凝胶色谱法进行血红蛋白分离(如图一),他在操作中加样的正确顺序是　　　　　　　　　,在执行图一中②所示操作时,色谱柱下端连接的尼龙管应该　　　　(填“打开”或“关闭”)。 (5)图二、图三分别是同学甲、乙利用同一种样品分离得到的结果,则在图三中与图二中蛋白质P对应的是　　　　。 【解题指南】解答本题需注意以下两点: (1)明确血红蛋白提取的实验流程和注意事项。 (2)理解SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的相关原理。 【解析】(1)加入柠檬酸钠的目的是防止血液凝固。(2)对样 品的处理包括红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、分离血红蛋 白溶液、透析